[发明专利]病原微生物核酸无扩增检测与分型方法

摘要

本发明公开了一种病原微生物核酸无扩增检测和分型方法以及相关的试剂盒，本发明以多探针并结合荧光量子点层层组装技术，实现病原微生物核酸无扩增检测和分型。本发明的方法对于低浓度核酸无需扩增，可以直接检测；多探针保证了信号放大过程中容易出现的假阳性问题，提高了检测准确性，该技术可以实现病原微生物拷贝数的实时检测与同步基因分型，速度快，成本低廉。

主权项

一种病原微生物核酸无扩增检测和分型方法，其特征在于包括如下步骤：(1)根据待测样品的核酸序列合成DNA和/或PNA探针1，2，3，所述的探针1，2，3能够分别与待测样品杂交并且互不重叠；(2)分别将探针1，2，3与磁性纳米颗粒和两种荧光量子点耦联，所述的荧光量子点的荧光可以相同，也可以不相同。(3)合成生物素连接的桥连DNA合/或PNA序列1，2以及互补的序列1’，2’，将序列1’和2’与步骤(2)中的两种荧光量子点分别耦联；(4)合成两种生物素修饰的荧光颜色不同的两种荧光量子点，这两种荧光量子点可以与步骤(2)中的荧光量子点相同，也可以不同；(5)选择步骤(2)中的探针修饰的磁性纳米颗粒和其中一种探针修饰的荧光量子点，将其与待测样品以及相应的桥连序列进行杂交并进行磁性分离；然后通过重复加入Sa(链霉亲和素)‑洗涤‑加入步骤(4)中的其中一种生物素修饰的荧光量子点‑洗涤的步骤进行层层组装，然后通过磁性分离得到待测样品的富集物，任选地，对富集物的样品进行荧光强度测定；(6)选择另外一种探针修饰的荧光量子点，将其与步骤(5)获得的富集物以及相应的桥连序列进行杂交并进行磁性分离；然后通过重复加入Sa‑洗涤‑加入步骤(4)中的另外一种生物素修饰的荧光量子点‑洗涤的步骤进行层层组装，然后通过磁性分离得到待测样品的第二富集物，任选地，对第二富集物的样品运用荧光光谱成像技术或者流式细胞仪技术进行检测。