[发明专利]一种水中两虫的富集、纯化方法及其含量的测定方法有效
申请号: | 201210275179.2 | 申请日: | 2012-08-06 |
公开(公告)号: | CN103571751A | 公开(公告)日: | 2014-02-12 |
发明(设计)人: | 于建伟;周美芝;杨敏;张冬青 | 申请(专利权)人: | 中国科学院生态环境研究中心 |
主分类号: | C12N1/10 | 分类号: | C12N1/10;C12Q1/06;C12R1/90 |
代理公司: | 北京元本知识产权代理事务所 11308 | 代理人: | 叶凡 |
地址: | 100085*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | 本发明涉及的是一种水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的富集、纯化方法及其含量的检测方法。本发明方法包括:首先向水样中加入氯化钙和碳酸氢钠,调节水样pH,在碱性条件下“两虫”随着生成的碳酸钙沉降、富集;收集沉淀后加入氨基磺酸溶液进行酸解离,然后进行密度梯度离心处理得到“两虫”纯化液,最后将“两虫”通过过滤附着在醋酸纤维膜上,染色处理后进行荧光显微镜检测,计数。本发明方法对水样中“两虫”的浓缩和分离纯化方法进行改进,减小了镜检时背景杂质的干扰,检测方法的回收率高,检测结果准确,符合美国国家环保局制定的用于测定水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的质量控制标准。 | ||
搜索关键词: | 一种 水中 富集 纯化 方法 及其 含量 测定 | ||
【主权项】:
一种水中隐孢子虫和贾第鞭毛虫的富集和纯化方法,包括如下顺序进行的步骤:1)沉降、富集处理向水样中加入氯化钙和碳酸氢钠,然后调节水样的pH,在碱性条件下隐孢子虫和贾第鞭毛虫随着生成的碳酸钙沉淀一起沉降,得到隐孢子虫和贾第鞭毛虫沉淀;2)酸解离处理向隐孢子虫和贾第鞭毛虫沉淀中加入酸性物质,酸解离处理,碳酸钙沉淀溶解,得到酸解离隐孢子虫和贾第鞭毛虫沉淀;(3)纯化处理向酸解离隐孢子虫和贾第鞭毛虫沉淀中加入磷酸盐‑吐温缓冲溶液,混匀,制成隐孢子虫和贾第鞭毛虫悬浮液,接着向悬浮液中加入Percoll‑蔗糖介质,然后进行密度梯度离心处理,离心混合液分为3层,取中间层,得纯化的隐孢子虫和贾第鞭毛虫。
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