[发明专利]单离子束时间相关单光子计数荧光检测技术

摘要

本发明公开了一种单离子束时间相关光子计数荧光检测方法，建立时间相关单光子计数（TCSPC）荧光检测技术，获得具有时间分辨特性的离子辐照荧光信号，把单离子束作为激发源，激发样品荧光，同时将离子信号作为时间相关单光子计数系统工作的触发信号，用单离子束替代了目前所普遍使用的脉冲激光源，所检测的荧光本身包含了离子辐照效应，正符合离子束生物学研究的需要，离子具有质量和动能，可以激发更强的荧光；本发明的方法中没有激光，减小了背景杂散光的影响，信噪比大，为国际首创。

主权项

一种单离子束时间相关单光子计数荧光检测方法，包括有单离子束装置、时间相关单光子计数（TCSPC）系统，其特征在于：还包括有显微镜、薄膜闪烁体，其具体方法步骤如下：1）将薄膜闪烁体置于单离子束装置的发射端口的上方；2）将样品架置于薄膜闪烁体的上方，样品架上放置生物样品；3）显微镜的物镜置于生物样品的上方；4）在显微镜的光路出口处倾斜放置一个半透半反滤光片；5）半透半反滤光片的反射光路和透射光路上各置一个光电倍增管；6）反射光路上的光电倍增管电信号输出端接至TCSPC系统触发端，透射光路上的光电倍增管电信号输出端通过一个延时器接至TCSPC系统信号输入端；7）先开启显微镜、光电倍增管、光电倍增管、时间相关单光子计数系统，再开启单离子束装置；8）单离子束装置自下向上连续发射单个离子，离子依次通过薄膜闪烁体和生物样品，薄膜闪烁体产生光子、生物样品产生荧光，闪烁体光子和荧光光子均通过显微镜而被显微镜物镜聚集并入射到半透半反滤光镜上，由半透半反滤光镜将此两种光子分离，反射光路上的闪烁体光子经光电倍增管转化为电信号作为TCSPC系统的触发信号接至TCSPC系统；透射光路上的荧光光子经光电倍增管转化为电信号，再经延时器，输入到TCSPC系统。