[发明专利]一种H2O2诱导的NIH-3T3细胞衰老模型无效
| 申请号： | 201210242060.5 | 申请日： | 2010-12-24 |
| 公开（公告）号： | CN102747030A | 公开（公告）日： | 2012-10-24 |
| 发明（设计）人： | 黄厚才 | 申请（专利权）人： | 江苏省中医药研究院 |
| 主分类号： | C12N5/073 | 分类号： | C12N5/073 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 210028 江苏省*** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | 一种H2O2诱导的NIH-3T3细胞衰老模型。本发明属于研究获得简单、快速的动物模型来检验抗衰老药物的疗效。采取如下的技术方案：将NIH-3T3细胞接种在含10%胎牛血清的MEM，在温度37℃、饱和湿度的培养箱中培养；从20代开始，细胞随机分3组后细胞培养，3-4天换液1次，细胞达到融合时，用0.025%胰酶后1:4传代，细胞至30代时随机收获部分细胞；将H2O2用DMEM完全培养液按不同浓度梯度稀释后，加入细胞中，形成浓度梯度，培养2小时后，弃去。用PBS或DMEM洗三遍，加入DMEM完全培养液继续培养；在连续培养到第十天，用胰酶消化6孔板中细胞，取其中5000个细胞接种到24孔板中培养24小时得抗衰老动物模型。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 sub 诱导 nih t3 细胞 衰老 模型 | ||
【主权项】：
一种H2O2诱导的NIH‑3T3细胞衰老模型，其制备方法为：将NIH‑3T3细胞接种在含10%胎牛血清的MEM，在温度37℃、饱和湿度的培养箱中培养；从20代开始，细胞随机分3组后细胞培养，3‑4天换液1次，细胞达到融合时，用0.025%胰酶后1:4传代，细胞至30代时随机收获部分细胞；将H2O2用DMEM完全培养液按不同浓度梯度稀释后，加入细胞中，形成0，300，600，1000，1500，2000μM浓度梯度，培养2小时后，弃去；用PBS或DMEM洗三遍，加入DMEM完全培养液继续培养；在连续培养到第十天，用胰酶消化6孔板中细胞，取其中5000个细胞接种到24孔板中培养24小时，用细胞衰老β‑半乳糖苷酶染色试剂盒染色细胞，在高倍显微镜下观察，染上蓝色的细胞即是衰老细胞，得细胞衰老模型。
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