[发明专利]一种用模式生物斑马鱼研究黄酮化合物Ⅱ相代谢的新方法

摘要

本发明公开了用模式生物斑马鱼研究黄酮化合物II相代谢的新方法，该方法通过选用斑马鱼作为药物代谢研究的对象，通过优化的实验分组方法进行实验分组设计，采用优选的药物给药方式进行给药，并采用优选的方法提取经斑马鱼代谢后的黄酮化合物代谢物，尤其采用优选的分析方法对代谢物进行分析，整个实验方法可操作性强，能客观的反应药物特别是黄酮化合物在体内的真实II相代谢情况，实验结果准确度高，能克服一般体外代谢实验难以体现在体代谢综合结果的缺点和一般体内代谢实验所用药量大、劳动强度高的缺点，实验方法可重复性强，所需受试药物量少，成本低，劳动强度低，应用范围广泛，且可成批量进行实验研究，工作效率高。

主权项

一种用模式生物斑马鱼研究黄酮化合物II相代谢的新方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)取斑马鱼的成体鱼放入盛有水的容器里，分为空白溶剂组、空白鱼组、空白黄酮化合物组和黄酮化合物鱼组，空白鱼组和黄酮化合物鱼组斑马鱼数量相等，将受试黄酮化合物配成所需浓度，加入到黄酮化合物鱼组的水溶液中，空白鱼组加入等量的溶媒，空白溶剂组只加等量溶媒不放斑马鱼、空白黄酮化合物组加溶媒溶解的等量黄酮化合物不放斑马鱼，在黄酮化合物鱼组的斑马鱼暴露于药液后0h～48h，在不同时间点取鱼药液，于‑70℃冰箱放置；在末次取鱼药液24h或48h时间点将鱼取出，用纯净水迅速洗涤2～3次，处死，去除鱼鳍和鱼磷，称重，于‑70℃冰箱放置，空白溶剂组、空白鱼组和空白黄酮化合物组于0h、24h或48h时同法取样，备用；(2)取步骤(1)得到的各时间点鱼药液冷冻干燥或氮气、空气吹干，残渣加适量50％‑100％甲醇或乙腈溶解，过0.45μm或0.22μm滤膜或15000转/min离心10～20min，取滤液或上清液进行高效液相色谱HPLC分析或高效液相色谱与质谱联用LC‑MS分析；取24h或48h时间点斑马鱼鱼体剪碎，称重，匀浆，匀浆液加甲醇或乙腈除蛋白，3000～4000转/min离心10～20min取上清；或匀浆液离心后直接用有机溶剂萃取药物成分，离心取有机溶剂萃取液，合并萃取液，将除蛋白离心上清液或萃取液用氮气或空气吹干，残渣加50％～100％甲醇溶解，过0.45μm或0.22μm滤膜或约15000转/min离心10～20min，滤液或上清液进行HPLC分析或HPLC‑MS分析。