[发明专利]具有美白功能的小球藻类金属硫蛋白的提取方法

摘要

本发明公开了一种具有美白功能的小球藻类金属硫蛋白的提取方法，本发明采用氯化锌胁迫培养普通海洋小球藻，通过不同锌胁迫浓度和胁迫时间的考察，可获得类金属硫蛋白的最优诱导条件，通过提取、分离和纯化过程，得到类金属硫蛋白制品。通过抑制酪氨酸酶活性试验证明，小球藻类金属硫蛋白浓度为1.2mg/mL时，能使二酚酶的活性下降87%，使单酚酶在2300秒内未呈现出活性，说明该蛋白质具有良好的美白功能，在化妆品、保健品领域有广阔的应用前景。

主权项

一种具有美白功能的小球藻类金属硫蛋白的提取方法，其特征在于：它包括以下步骤：（1）利用0.05 mol/L的ZnCl2诱导处于对数生长期的普通海洋小球藻 (Chlorella vulgaris)， 培养24‑120 h后，考察不同锌胁迫浓度及培养不同时间对藻细胞内锌结合类金属硫蛋白诱导量的影响，确定ZnCl2的最佳诱导浓度和诱导时间；（2）根据步骤（1）确定的最佳ZnCl2胁迫浓度和胁迫时间，大量培养小球藻，取离心收集的藻细胞，按藻泥重量和提取液体积以1:10（w/v）的比例加入pH值为7.8的Tris‑HCl 缓冲液，进行超声波细胞破碎，经高速离心弃去沉淀，收集上清液；（3）上清液过层析柱G‑75，每10 min收集一管洗脱液，测定254 nm的吸光度值，并测定各收集管的锌含量，以第二个信号峰即254 nm吸收信号弱而锌信号强的组分峰为目标峰，确定类金属硫蛋白在G‑75洗脱分离的收集时间段，收集的组分经真空冷冻干燥即为类金属硫蛋白粗提物；（4）获得的类金属硫蛋白粗提物用超纯水复溶后，过层析柱G‑25进行脱盐，再次真空冷冻干燥后即得到类金属硫蛋白制品；（5）通过酪氨酸酶进行单酚酶和二酚酶的酶活性抑制率试验，确定类金属硫蛋白的美白功能。