[发明专利]重组人亲环素A抗体、其制备方法及ELISA试剂盒以及细胞株

摘要

本发明涉及一种重组人亲环素A抗体、其制备方法及ELISA试剂盒以及细胞株，解决了现有重组人亲环素A抗体制备过程中工艺条件复杂、特异性差、蛋白免疫学活性损失大的问题。通过将得到的诱导后菌体经或不经预纯化直接免疫实验动物，再经过筛选、纯化得到重组人亲环素A的特异性多克隆抗体或特异性单克隆抗体。本发明重组人亲环素A抗体由上述方法制得，本发明ELISA试剂盒中的固相载体和检测抗体含有上述抗体。本发明具有工艺条件简单、特异性好、纯化简单、蛋白免疫学活性损失少、操作简便的优点。

主权项

一种重组人亲环素A抗体的制备方法，包括以下步骤：（1）扩增人亲环素A编码区基因，通过酶切位点装入原核表达载体pET‑28a，得到重组表达质粒p28a‑CypA;（2）将重组表达质粒p28a‑CypA转化至大肠杆菌BL21，加入诱导剂诱导CypA蛋白的表达，得到诱导后菌体；（3）收集并破碎诱导后菌体，再通过免疫实验动物制备多克隆抗体血清，然后再通过差异性中和法去除多克隆抗体血清中的非针对CypA蛋白的非特异性蛋白抗体，得到含有只针对CypA蛋白的多克隆特异性蛋白抗体的血清；或者收集并破碎诱导后菌体，再通过免疫实验动物，免疫后动物脾脏细胞与骨髓瘤融合，得到杂交瘤细胞株，杂交瘤细胞株通过差异性ELISA筛选法得到只分泌针对CypA蛋白抗体的阳性细胞株，阳性细胞株通过普通培养法得到含有只针对CypA蛋白的单克隆特异性蛋白抗体细胞上清，或者将细胞株注入实验动物体内得到含有针对CypA蛋白的单克隆特异性蛋白抗体的腹水；（4）对步骤（3）中得到的含有多克隆特异性蛋白抗体的血清或单克隆特异性蛋白抗体的细胞培养上清液或腹水进行纯化得到纯化后的重组人亲环素A的特异性多克隆抗体或特异性单克隆抗体。