[发明专利]蛇毒神经生长因子活性多肽的筛选方法

摘要

本发明涉及生物技术领域，具体涉及蛇毒神经生长因子活性多肽的筛选方法。其包括：利用sputa NGF（vNGF）为模板构建融合蛋白质；通过pBluscriptIISK+和pQE30构建质粒表达系统；通过6X组氨酸回收提纯技术进行分离、鉴定、提纯，形成vNGF活性多肽的刺激物原液；验证原核表达vNGFβ片段的生物活性。本发明以sputa NGF为模板进行了功能区域的断点分析，提出以sputa NGF为模板，通过基因重组构建2个组蛋白标记的融合蛋白质作为研究模型的不同多肽刺激物的设计方案，研究蛇毒神经生长因子多肽的活性，以进行蛇毒神经生长因子活性多肽的筛选，并对sputa NGF的应用基础研究提供分子生物学支持。

主权项

蛇毒神经生长因子活性多肽的筛选方法，其特征在于，包括以下步骤：一、融合蛋白质的构建：选择活化的重组蛇毒神经生长因子，以vNGF为模板，进行功能区域断点分析，然后通过PCR引物法构建至少两个不同长度、不同组合的片段序列，并作标记；二、质粒表达系统的构建：将上述片段序列分别组装在pBluscriptII SK+质粒中，构建vNGF的转移载体，并使其在DH5a中克隆，形成活性多肽质粒转移系统，然后利用单一酶切点的黏性末端连接方法将具有相同黏性末端的至少两个不同长度的基因片段和目的片段连接，分别组装在pQE30质粒的BamHI和HindIII酶切位点之间，克隆并表达vNGF的活性多肽；三、通过6X组氨酸回收提纯技术进行分离、鉴定、提纯，形成vNGF活性多肽的刺激物原液；四、验证原核表达vNGFβ片段的生物活性，进行多肽筛选。