[发明专利]Hib多糖纯化工艺

摘要

本发明公开了一种Hib多糖纯化工艺，它包括收集多糖复合物沉淀、离心收集粗糖沉淀、洗涤粗糖沉淀、干燥粗糖、溶解粗糖、酚抽取、除酚、精制精糖八个步骤。本发明提供一种Hib多糖纯化工艺，使用本工艺进行人工纯化的Hib多糖在连续的生产批次内各个指标都能符合药典标准，并且在中间水平，杂质残留量远远低于标准限值，提高了制品质量；减少了操作步骤和药品使用量、相应的减少了废弃物的产生，更有利于环保，纯化条件相对温和并且在严密环境中处理制品，更能满足现行GMP对生产过程的要求，保护制品不受污染；Hib多糖的精制回收率与传统工艺相比较能提高20%～30%。

主权项

Hib多糖纯化工艺，其特征在于：它包括以下收集多糖复合物沉淀、离心收集粗糖沉淀、洗涤粗糖沉淀、干燥粗糖、溶解粗糖、酚抽取、除酚、精制精糖八个步骤：S1：收集多糖复合物沉淀：S11：将灭菌后的培养液进行离心处理，离心去除菌体，收集上清液；S12：向收集到的上清液中加入5～15%的十六烷基三甲基溴化铵溶液，直至终浓度为1～3‰，搅拌混合均匀后，于2～8℃下静置4～6小时，然后离心收集多糖复合物沉淀；S2：离心收集粗糖沉淀：S21：用适量0.4～1.0M的NaCl解聚多糖复合物，再加入95%乙醇至终浓度为20～30%（v/v），2～8℃静置12～20h，在3～5℃，4000～4500转/分离心条件下离心40～80分钟，然后去除沉降，收集上清液；S22：将上清液用0.65～1.2um的膜过滤，滤液用30KD膜超滤浓缩至原体积的1/3～1/2后加乙醇至终浓度为60～80％（v/v），搅拌混匀后于2～8℃静置12～20h；S23：在3～5℃，4000～4500转/分离心条件下离心40～80分钟后，弃上清，离心收集粗糖沉淀；S3：洗涤粗糖沉淀：用预冷乙醇和丙酮洗涤粗糖沉淀，去除多糖中的某些微量杂质；S4：干燥粗糖：在环境温度低于15℃下真空干燥粗糖10h以上，干燥完成后于‑40℃或以下贮存粗糖；S5：溶解粗糖：向干燥后的粗糖内加入1/10饱和醋酸钠溶液，直至终浓度为5～10mg/ml，于2～8℃下搅拌浸泡12～20h；S6：酚抽提：按粗糖：冷酚比为1：1的比例加入冷酚，充分混匀，在8～12℃，4000～4500转/分的离心条件下离心40～80分钟后收集上层水相；S7：除酚：用注射用水稀释上清液后用30～50KD膜超滤透析至酚残留量小于0.05%时收集超滤液；S8：精制精糖：用300KD膜超滤处理收集到的超滤液，去除核酸并浓缩，当核酸残留降低至0.8％以下时除菌过滤后分装，在‑40℃或以下冻存。