[发明专利]碱性磷酸酶标记抗体的方法

摘要

本发明属于生物医药技术领域，特别涉及一种碱性磷酸酶标记抗体的方法，采用如下步骤：包括碱性磷酸酶的溶解过程，碱性磷酸酶的氧化过程以及碱性磷酸酶与待标记的抗体溶液的反应过程，本发明同现有技术相比对酶氧化的试剂，缓冲液，氧化时间进行了优化，对操作过程中涉及到的透析繁琐操作进行了方法改进，简化了操作，缩短了时间。从而进一步提高了标记效果。

主权项

一种碱性磷酸酶标记抗体的方法，采用如下步骤：A)将5mg碱性磷酸酶溶解在含量为0.5ml浓度为0.05M，PH值为3.6‑6.6的NaAc溶液中，使碱性磷酸酶的浓度为3‑10mg/ml；B)向步骤A中的酶溶液内加入等体积的过碘酸钠溶液，并在室温为4摄氏度的条件下进行氧化，氧化时间为20min；C)向氧化后的酶溶液内，加入与步骤A所得溶液等体积的乙二醇‑NaCl溶液；D)向步骤C中的溶液内，加入含量为1.5ml的冰冷无水乙醇，混匀，并在室温为‑20℃的条件下静置1小时，4000g离心10min，得到氧化好的酶；E)用含量为0.5ml浓度为0.5M，pH值为8‑10的碳酸盐缓冲液溶解沉淀步骤D中得到的酶，并加戊二醛0.1ml，混匀；F)按质量比，酶∶抗体的比例范围为1∶1至1∶4的比例，加入待标记的抗体溶液进行反应，反应时间为1‑3小时；G)按质量比，NaBH4∶酶的比例范围为0.1∶1至0.2∶1的比例，加入NaBH4溶液，室温放置1‑3小时；H)加入0.6ml的冰冷无水乙醇，并在‑20℃的室温下静置1小时，4000g离心10分钟；I)按所需酶标抗体浓度用PBS溶解或冻干保存。