[发明专利]基于核酸适体结构的荧光信号转变机制检测汞离子残留的方法

摘要

本发明涉及一种基于核酸适体结构及荧光信号转变的机制检测汞离子残留的方法，是以标记有荧光素分子的汞离子核酸适体与标记有猝灭素的互补序列构成荧光检测体系，其中：汞离子核酸适体由27~28个碱基组成的茎环结构，拥有碱基GGAC和GTCC共价结合形成的茎，互补序列Q2的碱基序列为SEQIDNO.1；荧光检测体系检测汞离子残留的方法为：加入系列浓度的汞离子与互补序列Q2竞争结合核酸适体，根据荧光信号的变化来建立标准曲线，确定最低检出限和线性范围，然后对待测样品进行加标检测，根据标准曲线判断样品中汞离子含量。本方法快速简单，具有较高的灵敏度和选择性，样品需求量少，适用于实际样品中汞离子的检测。

主权项

一种基于核酸适体结构的荧光信号转变机制检测汞离子残留的方法，是以标记有荧光基团FAM的汞离子核酸适体与标记有荧光猝灭基团DABCYL的互补序列构成荧光检测体系，其特征在于：所述的汞离子核酸适体为源于镍离子RNA核酸适体的碱基序列合成的DNA碱基序列SEQ ID NO.7中截取的第23位至第44位碱基序列，并对该部分碱基序列进行改造后获得，获得的汞离子核酸适体是由27~28个碱基组成的茎环结构，拥有碱基GGAC和GTCC共价结合形成的茎，所述互补序列Q2的碱基序列为SEQ ID NO.1；荧光信号转变机制检测汞离子残留的方法为：a) 将以标记有荧光基团FAM的汞离子核酸适体和标记有荧光猝灭基团DABCYL的互补序列Q2按照浓度比1:2~4投放在bufferA缓冲液中，经过变性和复性，以485nm为激发波长，535nm为发射波长，进行荧光检测，记录荧光强度；b)将含有不同浓度汞离子的标样分别加入含有复合物的bufferA缓冲液，经过变性和复性，汞离子与互补序列Q2竞争结合核酸适体，以485nm为激发波长，535nm为发射波长，分别进行荧光检测，记录与不同浓度汞离子标样对应的荧光强度，建立标准曲线，确定该复合物的相关系数、最小检出限以及线性检测范围，建立与线性检测范围对应的线性方程；c) 向含有复合物的bufferA缓冲液中加入待测物质，经过变性和复性，待测物质中的汞离子与互补序列Q2竞争结合核酸适体，以485nm为激发波长，535nm为发射波长，进行荧光检测，记录待测物质的荧光强度；d)将待测物质的荧光强度与线性检测范围的标准曲线进行对照，通过标准曲线确定或通过线性方程计算得到待测物质中的汞离子残留量；所用bufferA缓冲液的成分为：50mM NaCl+7mM MgCl2+50mM Tris/HCl，bufferA缓冲液的PH=7.5；所述的变性和复性是指：在94℃变性5分钟，然后在25℃复性30分钟。