[发明专利]一种人IL-12亲和纯化层析柱、其制备方法及利用其纯化重组人IL-12的方法有效
申请号: | 201210093656.3 | 申请日: | 2012-03-31 |
公开(公告)号: | CN103360461A | 公开(公告)日: | 2013-10-23 |
发明(设计)人: | 田志刚;郑晓东;魏海明;程永凤;程民;孙汭 | 申请(专利权)人: | 中国科学技术大学 |
主分类号: | C07K1/22 | 分类号: | C07K1/22;C07K14/54;B01D15/08;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/18;C07K1/16;C07K16/24 |
代理公司: | 北京市汉信律师事务所 11373 | 代理人: | 王文生 |
地址: | 230026 安*** | 国省代码: | 安徽;34 |
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摘要: | 本发明涉及一种制备重组人IL-12亲和纯化层析柱的工艺、由该工艺制得的重组人IL-12亲和纯化层析柱、及用该亲和纯化层析柱纯化重组人IL-12的方法。具体地说,本发明涉及用抗人IL-12的杂交瘤细胞株制备抗人IL-12单克隆抗体,并用该抗体制备重组人IL-12亲和纯化层析柱,然后用该亲和纯化层析柱纯化重组人IL-12的工艺流程。更具体地说,本发明涉及一种采用亲和层析柱纯化重组人IL-12的方法,其特征在于用抗人IL-12单克隆抗体的杂交瘤细胞株制备抗体,用该抗体制备人IL-12亲和纯化层析柱,然后以该亲和纯化层析柱为基础进行纯化重组人IL-12的方法。 | ||
搜索关键词: | 一种 il 12 亲和 纯化 层析 制备 方法 利用 重组 | ||
【主权项】:
一种利用抗人IL‑12的单克隆抗体制备人IL‑12亲和纯化层析柱的方法,所述方法包括下述步骤:a.活化凝胶预处理:取适量的活化凝胶,用1mM HCl进行完全溶解,并用1mM HCl冲洗胶体,然后再用0.1M NaHCO3,冲洗胶体;b.抗rhIL‑12抗体的偶联及亲和层析柱的制备:通过超滤浓缩的方法将抗rhIL‑12抗体浓缩至4‑5mg/ml,然后将抗rhIL‑12抗体加入活化凝胶中,置4℃过夜,然后用0.1M NaHCO3冲洗胶体,用0.1M Tris‑HCl缓冲液封闭未结合的活性基团,然后用0.1M Tris‑HCl缓冲液和0.1M醋酸‑醋酸钠缓冲液交替冲洗胶体,最后将结合抗rhIL‑12抗体的胶体装柱,制备成纯化rhIL‑12的亲和层析柱。
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