[发明专利]微量游离mRNA提取和富集方法

摘要

本发明涉及微量游离mRNA提取和富集方法。本发明是对含微量游离mRNA的液体离心取上清，加入到Trizol LS溶液中震荡，加入氯仿，剧烈震荡，离心，吸取水相层加入70％乙醇，混匀，转移到RNA pure link mini kit收集管中离心，使用wash buffer1和2洗涤滤网和滤网上的RNA，离心，干燥滤网和RNA，加无RNA酶水溶解RNA，离心，加DNA酶，终止DNA酶反应，离心，获得最终富集并纯化的RNA。本发明解决了血浆游离mRNA的检测存在检出率很低，标本量需求大，重复性差等缺陷。本发明从少量液体中抽提和富集微量(＜1ug)游离mRNA的方法，实时定量荧光PCR扩增证实相关目的基因的表达，并且显著提高了微量游离mRNA的检出率，操作方便，灵敏度高，特异性强，可重复性强。

主权项

微量游离mRNA提取和富集方法，其步骤在于：(1)抽取含微量游离mRNA的液体，两次离心，获取上清；(2)取上清加入到Trizol LS溶液中，室温震荡；(3)向其中加入氯仿，剧烈震荡；(4)离心，吸取水相层至新管；(5)加入70％乙醇，混匀；将含有乙醇和RNA的液体转移到带有滤网的收集管中，离心；(6)洗涤滤网和滤网上的RNA；(7)离心，干燥滤网和RNA；(8)加无RNA酶水溶解RNA，离心；(9)加入DNA酶；(10)终止DNA酶反应，离心，获得最终富集并纯化的RNA，以其为模板，反转录为cDNA，‑20℃保存。