[发明专利]一种低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法

摘要

本发明是一种低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，涉及一种检测系统，属于分子生物技术领域。本发明利用基于荧光蛋白的双分子荧光互补技术，将通常需要两个基于单表达质粒载体的BiFC检测体系构建到一个双表达质粒载体系统中，可以明显降低BiFC检测方法在蛋白质-蛋白质相互作用研究中的假阳性率,并可实现定量分析。本发明还可用于基于基因文库的未知蛋白质-蛋白质相互作用的筛选研究，以及活体动物内的蛋白质-蛋白质相互作用检测。

主权项

一种低假阳性率的蛋白质相互作用检测方法，其特征在于，包括以下步骤:1) 将荧光蛋白在特定位点切割成两个蛋白序列片段，荧光蛋白的N端和C端分别命名为FPN和FPC；2）将待测目标蛋白A的DNA序列与FPN基因序列同时插入到双表达载体中的一个启动子的下游，另一个待测蛋白B和与FPC基因序列同时插入双表达载体中的另一个启动子下游，从而构建了基于双表达载体的双分子荧光互补系统；3）将同时含有待测目标蛋白A和B的双分子荧光互补系统转染细胞，培养16～24小时以后，使用荧光显微镜观察光源刺激前后是否存在荧光；如果两目标蛋白存在相互作用，则荧光蛋白的N端和C端靠近，从而自发重组为完整荧光蛋白，产生荧光信号；如果没有或者只有极其微弱荧光，证明两目标蛋白之间无相互作用。