[发明专利]利用SCAR标记鉴定甘蔗抗褐锈病性方法

摘要

本发明涉及一种利用SCAR标记鉴定甘蔗抗褐锈病性的方法，包括基因组DNA的提取、SCAR-PCR标记的检测体系建立和SCAR-PCR产物的检测。本发明的利用SCAR标记鉴定甘蔗抗褐锈病性的方法，具有灵敏度高，所需要的DNA用量少的特点；与常规的抗性鉴定相比，具有操作简便、检测时间短、准确性高、容易判断、重复性好和不受环境条件影响等优点。为甘蔗种质资源的评价和新品种的审定工作，提供了更为简便有效的抗褐锈病性鉴定体系，对加强我国抗褐锈病甘蔗育种和抗褐锈病甘蔗种质资源的保护工作具有重要意义。

主权项

一种利用SCAR标记鉴定甘蔗抗褐锈病性的方法，包括基因组DNA的提取、SCAR‑PCR标记的检测体系建立和SCAR‑PCR产物的检测，其特征在于：（1）SCAR‑PCR标记的检测：使用的检测引物是甘蔗SCAR‑A和SCAR‑B，其中，SCAR‑A是5'‑ACTCGGTGTCCTAGTTGTGT‑3′，SCAR‑B是5'‑GGACTCGGTATAGGACATCA‑3'；   （2）SCAR‑PCR标记的检测建立：SCAR‑PCR扩增体系为总体积25 μl，内含2.5 μl 10×PCR缓冲液，2.5 μl 25 mmol/L MgCl2，0.5 μl 10 mmol/L dNTP，10 mmol/L 的检测引物SCAR‑A和SCAR‑B各1.0 μl，1.25 U Taq DNA Polymerase，20‑50 ng基因组DNA，ddH2O补足到25 μl；SCAR‑PCR扩增程序如下：94 ℃ 4 min；94 ℃ 1 min，56 ℃ 1 min，72 ℃ 2 min，30个循环；72 ℃10 min；所述10×PCR缓冲液组成成分为100 mmol/L pH8.5 Tris‑HCl，500 mmol/L KCl和15 mmol/L MgCl2；    （3）SCAR‑PCR产物的检测：电泳检测的SCAR‑PCR扩增图谱中，在分子量为680 bp的位置出现DNA条带，为甘蔗抗褐锈病的标志。