[发明专利]基于LAMP的微生物目视化荧光显色基因检测方法无效
| 申请号： | 201210047714.9 | 申请日： | 2012-02-28 |
| 公开（公告）号： | CN102586438A | 公开（公告）日： | 2012-07-18 |
| 发明（设计）人： | 王业富;卢暄;郑虎 | 申请（专利权）人： | 武汉大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;G01N21/64 |
| 代理公司： | 武汉宇晨专利事务所 42001 | 代理人： | 黄瑞棠 |
| 地址： | 430071*** | 国省代码： | 湖北;42 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种基于LAMP的微生物目视化荧光显色基因检测方法，涉及一种微生物基因检测方法。本检测方法是①用缓冲蛋白胨水（BPW）按照国标法培养待检样品4h；②用水煮法从待测样品中提取DNA；③将DNA加入到LAMP反应体系中，65℃保温1h；④通过与对照组比较，肉眼观察待测样品结果，对样品进行定性分析。本发明与传统培养法相比，检测速度快，仅5h，加上样品DNA的提取制备，总共不超过6h；特异性好，灵敏度高；步骤简单，可重复性高；可同时进行多个样品检测。本发明可对微生物进行定性检测，并可替代一直沿用的传统的培养法和血清学检测方法。 | ||
| 搜索关键词： | 基于 lamp 微生物 目视 荧光 显色 基因 检测 方法 | ||
【主权项】：
一种基于LAMP的微生物目视化荧光显色基因检测方法，其特征在于包括下列步骤：①用缓冲蛋白胨水(BPW)按照国标法培养待检样品4h；②用水煮法从待测样品中提取DNA；③将DNA加入到LAMP反应体系中，65℃保温1h；④通过与对照组比较，肉眼观察待测样品结果，对样品进行定性分析。所述LAMP反应体系包括LAMP反应液和荧光显色剂；a)LAMP反应液LAMP反应液由LAMP 10×buffer 2.5μl，20μmol/L内引物FIP、BIP各2.0μl，20μmol/L外引物F3、B3各1.0μl，25mmol/L dNTPs 3.0μl，50mmol/L MgSO43.0μl，1.0mol/L甜菜碱5μl，Bst DNA聚合酶大片段1.0μl，无菌双蒸水2.0μl组成，反应液总体积22.5μl；b)荧光显色剂荧光显色剂是由10μmol/L‑20mmol/L的钙黄绿素1μl和60μmol/L‑0.1mol/LMnCl20.5μl组成。
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