[发明专利]一种鉴别牛羊肉真假的LAMP检测方法

摘要

本发明公开了一种鉴别牛羊肉真假的LAMP检测方法，属于分子遗传学领域。它从GenBank中检索获得牛种属特异性的保守序列设计引物，并利用LAMP实时浊度仪对设计引物进行特异性筛选；然后配置LAMP反应液，构建成检测体系；再取1μL提取的基因组DNA和1μL的荧光检测试剂加入LAMP反应液中进行LAMP扩增；根据反应液颜色进行阴阳性判断，若反应液变成绿色，说明待测样品存在牛羊肉。该方法可方便、准确的检测出被检肉产品是否存在牛羊肉。本方法的模板、引物制备简单，特异性和敏感度高，检测结果可通过肉眼直接观测，可满足具备相应设备的各检测部门进行检测的需要，应用前景广阔。

主权项

一种鉴别牛羊肉真假的LAMP检测方法，其特征是，(1)从GenBank中检索获得牛种属特异性的保守序列，并进行软件比对分析，确定序列的准确性；(2)根据步骤(1)的序列设计多组引物，每组引物包括一对外引物F3/B3和一对内引物FIP/BIP；并利用LAMP实时浊度仪对设计引物进行特异性筛选，确定高度特异性的引物；(3)配置23μL LAMP反应液，构建成检测体系；所述23μL LAMP反应液含有12.5μL 2×等温反应缓冲液、1μL 5μM Primer F3、1μL 5μM Primer B3、2μL20μM Primer FIP、2μL 20μM Primer BIP、1μL Bst DNA聚合酶、3.5μL水；其中：2×等温反应缓冲液含有40mM的pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷盐酸盐、20mM的氯化钾、16mM的硫酸镁、20mM的硫酸铵、20％的Tween20、1.6M甜菜碱、2.8mM dNTP；(4)按常规方法提取基因组DNA，取1μL提取的基因组DNA和1μL的荧光检测试剂加入LAMP反应液中，使终反应体积为25μL，10000rpm瞬时离心30秒混匀反应液；(5)置60℃恒温水浴中进行LAMP扩增；(6)根据反应液颜色进行阴阳性判断，若反应液变成绿色，说明待测样品存在牛羊肉；若为桔黄色，则待测样品不存在牛羊肉。