[发明专利]一种b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的纯化方法有效
| 申请号： | 201210037245.2 | 申请日： | 2012-02-17 |
| 公开（公告）号： | CN102558382A | 公开（公告）日： | 2012-07-11 |
| 发明（设计）人： | 吴强;罗力心;关晓峰;伍长华 | 申请（专利权）人： | 成都欧林生物科技股份有限公司 |
| 主分类号： | C08B37/00 | 分类号： | C08B37/00;A61K39/02;A61K39/102;A61P31/04 |
| 代理公司： | 成都金英专利代理事务所(普通合伙) 51218 | 代理人： | 袁英 |
| 地址： | 610000 四*** | 国省代码： | 四川;51 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的纯化方法，本方法使用羟基磷灰石进行Hib荚膜多糖的纯化，过程如下：将Hib荚膜多糖粗糖溶解于20mm磷酸盐缓冲液，将得到的Hib荚膜多糖粗糖溶液上样于羟基磷灰石层析柱；使用20mm磷酸盐缓冲液洗2个柱体积，收集流穿峰；用高盐缓冲液洗脱结合的蛋白质，将收集的流穿峰用G-25葡萄糖凝胶柱进行缓冲液置换，最终得到Hib荚膜多糖精糖原液。本发明的优点在于采用羟基磷灰石进行荚膜多糖的纯化，避免了使用苯酚对环境和人体带来的危害，并且得到的Hib荚膜多糖纯度可达到行业标准。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 流感嗜血杆菌 荚膜 多糖 纯化 方法 | ||
【主权项】：
一种b型流感嗜血杆菌荚膜多糖的纯化方法，其特征在于，包括以下步骤：A．装填一根羟基磷灰石层析柱，用20mM磷酸盐缓冲液平衡2个柱体积直至基线平稳；B．将50~150mg b型流感嗜血杆菌（Hib）荚膜多糖粗糖溶解于50ml 20mM 磷酸盐缓冲液，将得到的Hib荚膜多糖粗糖溶液上样于层析柱上；C．使用20mM磷酸盐缓冲液洗2个柱体积，收集流穿峰；D．用高盐缓冲液洗脱结合在层析柱上的蛋白质，再生层析柱；E．将收集的流穿峰用G‑25葡萄糖凝胶柱进行缓冲液置换，流动相为无热原的注射用水，收集含Hib荚膜多糖的洗脱峰，最终得到Hib荚膜多糖精糖原液。
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