[发明专利]一种猪瘟病毒S31基因的原核表达蛋白及其制备方法无效
申请号: | 201210013180.8 | 申请日: | 2012-01-17 |
公开(公告)号: | CN102532282A | 公开(公告)日: | 2012-07-04 |
发明(设计)人: | 毛立;李文良;江杰元 | 申请(专利权)人: | 江苏省农业科学院 |
主分类号: | C07K14/18 | 分类号: | C07K14/18;C12N15/40;C12N15/70;C12N1/21;C12R1/19 |
代理公司: | 南京经纬专利商标代理有限公司 32200 | 代理人: | 张素卿 |
地址: | 210014*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | 本发明涉及一种猪瘟病毒S31基因的原核表达蛋白及其制备方法,属于生物技术领域。根据猪瘟病毒(CSFV)S31基因序列,设计两对引物,构建了重组表达载体pET32a-S31,测序验证后转化原核表达受体菌E.coliBL21(DE3),IPTG诱导表达,重组融合蛋白分子量约44.4KD。经镍柱亲和层析纯化的蛋白能与CSFV阳性血清发生特异性的免疫印迹反应。试验表明,表达的蛋白具有检测灵敏度高,特异性强,应用该抗原进行检测时绝无散毒危险,可作为鉴定猪瘟病毒抗体的ELISA方法的检测抗原。 | ||
搜索关键词: | 一种 猪瘟 病毒 s31 基因 表达 蛋白 及其 制备 方法 | ||
【主权项】:
一种重组大肠杆菌表达的猪瘟病毒S31蛋白,该蛋白系将S31基因片段克隆入原核表达载体pET32a得到重组表达载体,将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)获得 重组大肠杆菌BL21(DE3),将该重组大肠杆菌BL21(DE3)培养至OD600达0.6‑0.8时加入终浓度为0.5mM的IPTG进行诱导表达,分离菌体蛋白经Ni亲和层析柱纯化获得,所述S31蛋白氨基酸序列为SEQ ID NO.1,即猪瘟病毒多聚蛋白的第1591‑1816位氨基酸残基,其编码S31蛋白的S31基因核苷酸序列为SEQ ID NO.2,即猪瘟病毒碱基序列的第5145‑5822位碱基。
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