[发明专利]一种乳铁蛋白肽的制备方法及其在食品抑菌中的应用方法

摘要

本发明涉及一种牛乳铁蛋白肽的制备方法及其在食品抑菌中的应用方法，该制备方法包括步骤：(i)基因工程菌活化；(ii)细菌裂解；(iii)包涵体分离和裂解；(iv)融合蛋白提取和酸水解；(v)色谱柱分离。该方法易行，操作简单，成本低廉，其制备所得的牛乳铁蛋白肽可用于水产品的抑菌，其应用方法为：将水产品清洗干净后，常温或0-4℃，在牛乳铁蛋白肽溶液中浸泡0.5-10小时。

主权项

一种牛乳铁蛋白肽的制备方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：(i)基因工程菌活化：基因工程菌在含硫酸卡那霉素的LB培养基上活化后，在发酵培养基上发酵，3～5小时后乳糖诱导6～10小时；(ii)细菌裂解：将诱导后的菌体加入到裂解缓冲液中，混匀后37℃孵育过夜，离心去上清，加入等体积包涵体洗涤缓冲液，37℃孵育2～3小时后，再离心去上清；(iii)包涵体分离和裂解：将细菌包涵体加入到蒸馏水中振荡洗涤0.5～1.5小时，离心去上清，然后再在包涵体分离液中振荡洗涤10～30min，离心去上清，最后再加入到包涵体裂解液中连续振荡18～22小时，离心收集上清(含融合蛋白)；(iv)融合蛋白提取和酸水解：用0.68倍体积的乙醇沉淀上述上清中的融合蛋白，‑20℃预冷10～30分钟后，离心收集沉淀和上清，再用3.5倍体积的乙醇沉淀上清中的融合蛋白，两次乙醇沉淀均为融合蛋白，将融合蛋白在盐酸溶液中，40～56℃水解25～35h；(v)色谱柱分离：调节步骤(iv)得到的融合蛋白酸水解产物pH与洗脱液基本一致，经滤膜过滤后上样于平衡过的CM52离子交换柱，洗脱液洗脱，收集样品峰，采用平衡过的Sephadex G‑25层析柱对样品进行脱盐，洗脱液洗脱，收集样品峰，所得蛋白进行冷冻干燥即为牛乳铁蛋白肽。