[发明专利]热休克凋亡脑胶质瘤细胞的制备与检测方法

摘要

本发明提出一种热休克凋亡脑胶质瘤细胞的制备与检测方法，其应用于热休克凋亡脑胶质瘤负载树突状细胞肿瘤疫苗的制备工艺，所述制备工艺采用先将肿瘤细胞处于热休克状态，诱导细胞高表达热休克蛋白(HSP)，再用化学药物诱导细胞凋亡进而制备成富含热休克蛋白的凋亡细胞抗原，制备好的抗原与未成熟的DC细胞混合培养获得成熟的DC疫苗。本发明采用热休克法负载制备得到的DC疫苗成熟度高，可用于诱导免疫应答。

主权项

一种热休克凋亡脑胶质瘤细胞的制备与检测方法，其应用于热休克凋亡脑胶质瘤负载树突状细胞肿瘤疫苗的制备工艺，所述制备工艺包括步骤：热休克凋亡脑胶质瘤细胞的制备和检测以及DC肿瘤疫苗的制备和检测；其中，所述热休克凋亡脑胶质瘤细胞的制备和检测方法包括：采用的人脑胶质瘤细胞株U251引自美国ATCC，按常规方法传代培养；用RPMI1640培养基调整细胞浓度至106/ml，将细胞置于40℃，5％CO2培养箱中3h，取出细胞培养瓶，加入白桦酯酸至终浓度为10μg/ml，将细胞培养瓶移至37℃，5％CO2培养箱继续培养诱导细胞凋亡；收获凋亡细胞，加入无菌PBS洗涤4次，获得凋亡肿瘤细胞抗原；肿瘤细胞经40℃处理3h后用FITC‑Annexin‑V和PI双标细胞后进行流式检测计算凋亡率结果；软琼脂克隆法检测细胞抗原体外成瘤能力；以及取制备抗原进行内毒素检测。