[发明专利]水稻胡麻叶斑病原菌的分子鉴定方法

摘要

本发明涉及水稻胡麻叶斑病原菌的一种分子鉴定方法。所说的分子鉴定包括扩增到的ITS区、18S rDNA核苷酸序列，核苷酸序列如SEQ ID NO.1及SEQID NO.2所示。分子鉴定时，先提取待测菌的DNA，用文中胡麻叶斑病原菌的18S rDNA和ITS引物通过聚合酶链式反应扩增挑取到的DNA。如果有扩增产物，测定扩增产物的核苷酸序列，交其与SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2分别进行比较。在上述分析基础上，判断待测病原菌是否是胡麻叶斑病原菌。用本发明的方法可以为胡麻叶斑病的有效诊断和防治提供可靠依据。

主权项

一种利用18S rDNA和ITS长度和序列特征鉴别胡麻叶斑病原菌的方法，包括如下步骤：(1)从待鉴定的真菌样品中提取基因组DNA。(2)以步骤(1)提取到的DNA样品为模板，用针对胡麻叶斑病原菌18S rDNA和ITS的专用引物进行聚合酶链式反应扩增得到待鉴定真菌的18S rDNA和ITS片段产物。扩增18S rDNA的正向引物P1为：5′‑GTA GTC ATA TGC TTG TCTC‑3′，反向引物P2为：5′‑TCC GCA GGT TCA CCT ACGGA‑3′。扩增ITS的正向引物P3为：5′‑TCC GTA GGT GAA CCT GCGC‑3′，反向引物P4：5′‑TCC TCC GCTTAT TGA TATGC‑3′。在50μL的反应体系中完成扩增反应，以双蒸水代替模板DNA作空白对照。(3)如果步骤(2)能获得扩增产物，将扩增反应得到的产物进行琼脂糖凝胶电泳。纯化含有扩增产物的电泳条带。(4)将步骤(3)纯化后的18S rDNA和ITS产物直接进行测序，得到待鉴定的真菌样品的18S rDNA和ITS的核苷酸序列。(5)将步骤(4)获得的核苷酸序列与SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2中的核苷酸序列进行对比，如果吻合，则待鉴定真菌判断为胡麻叶斑病原菌。