[发明专利]一种稳定、高效从红麻叶片中分离蛋白质的双向电泳方法无效
| 申请号： | 201110372481.5 | 申请日： | 2011-11-22 |
| 公开（公告）号： | CN102382166A | 公开（公告）日： | 2012-03-21 |
| 发明（设计）人： | 祁建民;陈涛;李小珍;徐建堂;秦先超;方平平;林培清;陶爱芬 | 申请（专利权）人： | 福建农林大学 |
| 主分类号： | C07K1/26 | 分类号： | C07K1/26 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350002 福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | 本发明研发了一种高效、稳定从红麻叶片中分离蛋白质的双向电泳方法，本发明结合红麻叶片的生物质化学特性，在传统的蛋白质双向电泳方法上，对红麻叶片蛋白质提取方法、IPG胶条pH范围选择、蛋白质上样方式、上样量、分离胶浓度及蛋白质点分析软件参数设定等方面加以改进和优化。运用本发明的方法能获得蛋白质点清晰、数目较多、分布均匀、背景清楚的红麻叶片蛋白质的双向电泳凝胶图谱，且实验结果稳定，在24cm＊16cm的凝胶上平均可检测到1300个蛋白质点，此发明为进一步开展红麻及其麻类的蛋白组学和分子生物学的研究奠定工作基础。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 稳定 高效 红麻 叶片 分离 蛋白质 双向 电泳 方法 | ||
【主权项】：
一种稳定、高效从红麻叶片中分离蛋白质的双向电泳方法，其特征在于，采用pH值为8.0的Tris‑饱和酚抽提红麻叶片中的蛋白质，然后进行双向电泳，双向电泳的条件如下：第一向电泳：红麻蛋白质上样量为1.4mg，使用24CM，pH值为4‑7的IPG胶条、pH值为4‑6.5的IPG buffer；第一向电泳参数设置为：20℃、50μA/strip、50V 12h 、200V 1h 、500V 1h 、1000V 1h 、梯度1000V～8000V 1h 、8000V 52000vhr；第二向电泳中采用12%分离胶来纵向分离蛋白，第二向电泳参数设置为：15℃、10μA/strip 1h 、15μA/strip。
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