[发明专利]一种免疫亲和层析介质的制备方法及在纯化河豚毒素中的应用

摘要

一种免疫亲和层析介质的制备方法及在纯化河豚毒素中的应用，免疫亲和层析介质的制备包括：固相载体溴化氰法活化；河豚毒素特异性抗体与溶胀后的活化固相载体偶联；封闭；洗涤。所述的免疫亲和层析介质用于河豚毒素纯化的方法，包括：含有河豚毒素的样品前处理；河豚毒素免疫亲和层析柱的制备；上样；洗脱；收集洗脱液。本发明的免疫亲和层析介质具有高选择性，对样品中的河豚毒素有很强的保留和浓缩能力，且水相操作，操作简单，纯化效果好，免疫亲和色谱柱能重复使用，能节省大量的溶剂，降低分析成本和环境污染。

主权项

一种免疫亲和层析介质的制备方法，其特征是由固相载体和河豚毒素特异性抗体组成，包括以下步骤：（1）先将固相载体经溴化氰法活化；（2）取河豚毒素特异性抗体与溶胀后的活化固相载体置于pH 6.0‑7.5，0.1‑0.5 mol/L的醋酸‑醋酸钠缓冲液中在室温下振荡偶联，其中抗体与溶胀后的活化固相载体的质量比为1: 100；（3）将上述偶联凝胶产物转入其5‑10 倍体积的pH 6.0‑7.5，含有0.1‑0.5 mol/L 醋酸的Tris‑HCl缓冲液中，室温下振荡反应2 h进行封闭；最后用5‑10 倍于封闭后凝胶体积的pH 6.0‑7.0的醋酸‑醋酸钠缓冲液洗涤2‑4 次；所述的固相载体可为交联葡聚糖、聚丙烯酰胺凝胶、交联琼脂糖或多孔玻璃等。