[发明专利]一种高通量筛选药物的核磁共振方法

摘要

本发明公开了一种高通量筛选药物的核磁共振方法，步骤：（a）配置靶标生物大分子和待筛选的药物混合水溶液，将靶标生物大分子和待筛选分子加入水溶液中混合均匀；（b）将混合溶液装入NMR样品管，放入谱仪中，选择性检测与靶标蛋白质结合的配体分子的信号：（1）通过辐射阻尼效应建立溶剂水的选择性扰动；（2）通过交换和极化转移等效应；（3）将建立的信号进行激发，选择性检测蛋白质及其配体分子，该操作由两个脉冲模块单元构成：信号建立模块和检测模块；（c）完成配体分子的确认。该方法操作简便易行，实验检测的准确性和灵敏度高，有效的提高了药物筛选的准确性和效率。

主权项

一种高通量筛选药物的核磁共振方法，其步骤是：(a)配置靶标生物大分子和待筛选的10‑50种药物或配体分子的混合水溶液，靶标生物大分子为可溶于水的蛋白质，DNA或RNA分子，其浓度为μm，将靶标生物大分子和待筛选分子先后加入水溶液中混合均匀，溶液中加入盐以保持pH0‑14，离子浓度，使生物分子结构稳定；(b)将该混合溶液装入NMR样品管，放入谱仪中，采用配体药物分子选择性检测的核磁共振技术，选择性检测与靶标蛋白质结合的配体分子的信号；(c)完成配体分子的确认：所述的配体药物分子选择性检测，其步骤是：(1)通过辐射阻尼效应建立溶剂水的选择性扰动；(2)通过交换和极化转移等效应，建立溶剂水和靶标生物分子及其配体之间的信号传递，信号传递过程如下：水信号通过与生物分子NH基团的交换和NOE等效应传递到生物大分子上，通过NOE等效应转移到结合于其上的配体分子，使结合的配体分子NMR信号与生物大分子和水发生了一致强度变化；(3)将所建立的信号进行激发，选择性检测蛋白质及其配体分子。所述的配体药物分子选择性检测由两个基本脉冲模块单元构成：(a)信号建立模块：D1为每次扫描完成后的恢复时间，为3‑5倍的水质子的纵向弛豫时间，随后的π脉冲是用于产生水的辐射阻尼效应，其后不同延迟时间所施加的脉冲梯度场单元用于调控辐射阻尼效应，大的脉冲梯度场能够使辐射阻尼效应减小以致消失，采用两种不同模式：模式1中，π脉冲施加之后，施加脉冲梯度场，辐射阻尼效应被消除；模式2中，π脉冲施加，等待时间的大小为5ms‑2s，使辐射阻尼效应作用之后，再施加脉冲梯度场，模式中的脉冲梯度为了保持实验的稳定对比施加，模式1中水的辐射阻尼效应被脉冲梯度场消除，模式2脉冲梯度场时间较晚，水的辐射阻尼效应已经完全作用，模式1和2的区别就实现水磁化的选择性激发，此外Tmix为混合时间，转移NOE等效应传递到靶标蛋白质和与其结合的配体小分子上，建立靶标蛋白质和其配体分子的选择性激发；(b)检测模块：使用不同的方法对信号建立模块中所建立的磁化矢量：通过辐射阻尼效应所建立的靶标蛋白质和其配体分子的信号进行检测，对于最基础的一维谱观测，直接使用π/2激发脉冲配合溶剂峰抑制技术实现检测，观测靶标蛋白质及结合态小分子，在π/2激发脉冲后采用弛豫加权技术抑制大分子较宽的谱线，通过施加10‑30ms的自旋锁定脉冲，实现大分子信号的抑制，小分子信号得以选择性检测。