[发明专利]以大花香水月季茎段为外植体的植株再生方法

摘要

本发明提供一种以大花香水月季茎段为外植体的植株再生方法，通过对大花香水月季中部枝条，切段、灭菌后进行继代培养一个月，再将大花香水月季无菌苗的叶片横切数刀，接种到愈伤诱导培养基上，待长出胚性愈伤组织；再在分化培养基上培养待胚性愈伤组织分化出不定芽；然后接种到壮苗培养基上，长高后接种到生根培养基上培养即形成完整植株。本发明所用的外植体采集方便，可以周年进行大花香水月季的扩繁和细胞的培养；所得到的胚性愈伤组织，可以作为遗传转化的良好受体，为大花香水月季遗传转化体系的建立提供受体；所建立的再生体系可以解决大花香水月季繁殖上的难题，以更好的保护和利用该资源。

主权项

一种以大花香水月季茎段为外植体的植株再生方法，其特征在于经过下列各步骤：A．选择腋芽饱满的大花香水月季中部枝条，并切成单芽茎段，经消毒处理后，接种在1.0～2.0mg/L 6‑BA + 0.1～0.15 mg/L NAA + 6.2～7.0g/L琼脂 + 30g/L蔗糖，且pH值为5.8～6.1的MS基本培养基上，直至腋芽萌发后，再接种在1.0mg/L 6‑BA + 0.01～0.02 mg/L NAA + 6.2～7.0g/L琼脂 + 30g/L蔗糖的MS基本培养基上，于23～26℃、光照强度2000～3000Lx，光照时间14h/d的条件下，进行继代培养25～35天，得到大花香水月季的无菌苗； B．将步骤A所得大花香水月季无菌苗的叶片切下，在小叶主脉处横切出伤口，叶背向下接种到下列愈伤诱导培养基上：MS基本培养基 + 5～9 mg/L 2,4‑D + 30g/L葡萄糖 + 2.5～3.0g/L植物凝胶，pH值为5.8～6.1，并在黑暗条件下培养，5～10天切口处膨大，可以观察到愈伤组织；C．将步骤B所得愈伤组织接种到下列愈伤分化培养基上：MS基本培养基+1.0～5.0 mg/L TDZ + 1.0 mg/L GA3 + 0.1mg/L NAA +0～1.0 mg/L 6‑BA+ 30g/L葡萄糖 + 2.5～3.0g/L植物凝胶,pH值为5.8～6.1，并在黑暗条件下培养10～15天，之后在光照强度为2000～3000Lx，光照时间为14h/d条件下，培养10～15天，使愈伤组织分化出不定芽；D．将步骤C得到的不定芽接种到下列壮苗培养基上：MS基本培养基+1.0mg/L 6‑BA +0.01～0.02mg/L NAA +0.3～0.5mg/L GA3 +30g/L蔗糖+6.2～7.0g/L琼脂粉，pH值为6.0，培养至长出2～3cm高后，接种到下列生根培养基上：1/2MS基本培养基(大量元素减半)+ 0.1～0.3mg/L NAA +30g/L蔗糖+6.2～7.0g/L琼脂粉，pH值为5.8～6.1，并在光照强度为2000～3000Lx条件下，光照时间为14h/d条件下，进行生根培养，20～30天后即得植株。