[发明专利]一种用高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的方法

摘要

一种用高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的方法。本发明提供一种以醋酸纤维素/聚丙烯复合膜为载体，采用氧化剂高碘酸钠氧化法和交联反应相结合的固定化方法，用该氧化后的醋酸纤维素/聚丙烯复合膜固定化脂肪酶。研究了高碘酸钠浓度、活化时间、酶液浓度、交联时间和交联剂浓度等不同固定化条件对脂肪酶固定化后酶活力的影响，通过响应面优化法，进一步优化了经高碘酸钠氧化后的醋酸纤维素/聚丙烯复合膜固定化脂肪酶的优势。采用先对醋酸纤维素/聚丙烯复合膜进行氧化活化，再进一步进行脂肪酶的固定化，使脂肪酶与载体结合的更稳定，不易溶脱，而利于固定化酶的回收利用。最终得到的固定化酶活为0.52U/cm2。

主权项

一种用高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的方法，其特征在于用高碘酸钠氧化法固定化脂肪酶的方法通过以下步骤实现：一、高碘酸钠的氧化活化：取一张膜悬浮于10ml不同浓度的高碘酸钠溶液中，室温下置于摇床中摇动一定时间，取出立即用去离子水洗至中性，吸干水分；二、脂肪酶的固定化：取若干份1cm2的纤维素膜于平皿中，分别与一定量的酶液和pH为5.8的磷酸盐缓冲液，加入一定量戊二醛于28℃进行交联反应，交联反应结束后悬浮于10ml 1％氢硼化钠溶液中于4℃反应30min，然后用0.1mol的HAI溶液、2mol的Kcl溶液和水分别洗涤三次，取出测定酶活；三、酶活力的测定：测定固定化酶酶活时将已固定化酶的滤纸剪碎，平均分成两份，其中一份做空白；四、固定化条件的优化：分别在高碘酸钠浓度为0.01～0.3mol/L，活化时间30～100min，温度5～35℃，酶液浓度0.01～0.2g/10mL，交联时间1～6h，交联剂浓度0.05～0.6％的条件下，通过测定固定化酶活力得到最佳的固定化条件。五、通过响应面寻优得到最佳的固定化条件，在最佳的固定化条件下测得酶活力为最优0.5U/cm2。六、固定化酶酶学性质的讨论：在温度15～55℃，PH5.5～9.5范围内，通过测定固定化酶和游离酶的活力，得出固定化酶的最适温度，最适PH值。并通过比较确定固定化酶较游离酶稳定性好。