[发明专利]一种稀少糖核苷酸的制备方法

摘要

本发明涉及一种稀少糖核苷酸的制备方法，特别涉及一种利用糖核苷酸合成酶制备稀少糖核苷酸及其衍生物的方法，属于糖核苷酸合成技术领域。本发明利用空肠弯曲菌C.je juniNCTC 11168来源的一种能够催化尿苷二磷酸-N-乙酰氨基葡萄糖(UDP-GlcNAc)生物合成的糖核苷酸合成酶，以酶的天然底物及其衍生物做催化反应底物，一步酶法合成系列糖核苷酸及稀少糖核苷酸。本发明采用底物识别广泛的糖核苷酸合成酶，能够催化多种糖核苷酸和稀少糖核苷酸的合成，催化反应效率较高，大大降低了糖核苷酸类产品的生产成本，能够适用于糖核苷酸和稀少糖核苷酸的大规模制备，具有潜在的应用前景。

主权项

一种稀少糖核苷酸的制备方法，步骤如下：(1)将糖‑1‑磷酸溶于Tris‑HCl缓冲液，制得浓度为100mM的糖‑1‑磷酸溶液；将核苷三磷酸或脱氧核苷三磷酸溶于Tris‑HCl缓冲液，制得浓度为100mM的核苷三磷酸溶液或脱氧核苷三磷酸溶液；(2)将步骤(1)制得的糖‑1‑磷酸溶液与核苷三磷酸溶液或脱氧核苷三磷酸溶液分别按反应体系终浓度4～10mM的添加量加入到反应容器中，再按反应体系终浓度4～10mM的添加量添加MgCl2、反应体系终浓度4～10IU/mL的添加量添加焦磷酸水解酶、反应体系终浓度4～10U/mL的添加量添加糖核苷酸合成酶，Tris‑HCl缓冲液补足体积，得反应体系，在30～42℃的条件下，反应1～3小时，沸水浴终止反应，10,000～13,400rpm离心10～20min，取上清，过0.22～0.45μm的滤膜，得滤液；(3)将步骤(2)制得的滤液，经色谱分离、冷冻干燥，制得稀少糖核苷酸。