[发明专利]罗氏沼虾双顺反子病毒的LAMP检测试剂盒及检测方法

摘要

罗氏沼虾双顺反子病毒的LAMP检测试剂盒及检测方法，属于靶DNA片断的检测技术领域。该检测试剂盒包括RNA提取试剂和RT-LAMP反应试剂，该检测方法包括1）罗氏沼虾RNA抽提；2）罗氏沼虾双顺反子病毒的RT-LAMP扩增：3）显色检测。该检测试剂盒特异性强，敏感性高，该检测方法方便、灵敏、准确、快速，为罗氏沼虾幼体综合症的预防奠定基础。

主权项

罗氏沼虾双顺反子病毒的LAMP检测试剂盒，其特征在于包括RNA提取试剂和RT‑LAMP反应试剂，所述的RNA提取试剂含有Trizol、氯仿、异丙醇、无RNase的70%乙醇和DEPC水；所述的RT‑LAMP反应试剂含有:1）RT‑LAMP预反应液：20～25mM pH为8.2～9.0的Tris‑HC1、6～10mM硫酸镁、10～12mM氯化钾、8～12mM硫酸铵、0.l～0.2% Triton X‑100或Tween 20、1～1.6 mM dNTP、0.6～1.0 M甜菜碱、1.5～2.2 μM引物MRDV‑FIP、1.5～2.2μM引物MRDV‑BIP、0.15～0.3μM引物MRDV‑F3、0.15～0.3μM引物MRDV‑B3， 引物MRDV‑FIP核苷酸序列如SEQ No.1所示，引物MRDV‑BIP核苷酸序列如SEQ No.2所示，引物MRDV‑F3核苷酸序列如SEQ No.3所示，引物MRDV‑B3核苷酸序列如SEQ No.4所示；2）逆转录酶：每微升含10个活性单位的AMV逆转录酶；3）聚合酶：每微升含8个活性单位的Bst DNA聚合酶；4）RT‑LAMP反应稳定液：由矿物油或液体石蜡油组成；5）RT‑LAMP反应显色液：含有10 % SYBR Green I的荧光染料。