[发明专利]大体积水样中富集水体中病毒的方法

摘要

本发明属于环境监测技术领域，具体涉及一种大体积水样中富集水体中病毒的方法。本发明方法，包括如下步骤：病毒采集装置灭菌；消除水样中的残余消毒剂；利用经消毒过的过滤系统以负压抽滤水样；将富集了水中病毒的滤芯放入pH为9.5的牛肉浸膏洗脱液中浸润；将洗脱液先用离心机离心，将细菌分离出去，收集上清液，加入PEG8000溶液，再用离心机离心，弃去上清液，保留离心管底部的沉淀物；沉淀物中加入PBS，得到重悬的病毒浓缩液。本方法操作简单、步骤简洁、对设备要求不高，且适用于现场将大体积的水样浓缩成小样本浓缩液后用于实验室检测。

主权项

一种富集水体中病毒的方法，其特征在于具体步骤为：（1）采集水样，并对水样进行前处理，消除水样中残余的消毒剂；（2）过滤通过蠕动泵，以4~7 L/min的速度抽取实际水样，利用过滤系统，以负压抽滤经步骤1处理的水样，将水样中的病毒富集于过滤系统的滤芯上，其中滤芯为阳电荷的混合纤维酯微孔滤膜；（3）洗脱病毒将富集了水中病毒的滤芯从滤器中取出，放入pH为8.5~10的200~600 mL牛肉浸膏洗脱液中浸泡1~5 min，然后取出，再放入pH为8.5~10的200~400 mL的牛肉浸膏洗脱液中浸泡2~6 min，弃去滤芯，合并两次的洗脱液；其中牛肉浸膏洗脱液中，牛肉膏的浓度为1.0~3.0% （mg/mL），甘氨酸的浓度为0.02~0.06 M；（4）洗脱液浓缩将上一步骤获得的洗脱液置于低温冷冻离心机中，在4℃、3000~5000 r/min离心10~20 min，将细菌分离出去，收集上清液，加入生物絮凝剂PEG 8000溶液，再于4℃、6000~10000 r/min离心30~60 min后，弃去上清液，保留离心管底部的沉淀物；其中生物絮凝剂PEG8000溶液为26%~36%的PEG、0.6~1.0mol/L的NaCl；（5）重悬浓缩液在上一步骤获得的沉淀物中加入1~6 mL 0.1~0.4 mol/L的磷酸盐缓冲液，该磷酸盐缓冲液的pH 6.8~7.6，充分溶解离心管底部沉淀物，得到重悬的水中病毒的浓缩液；然后，测定该样品的病毒效价，根据实际抽取的水样量计算实际水中的病毒效价。