[发明专利]一种单个核细胞移植前状态的准备方法

摘要

本发明公开了一种单个核细胞在移植前状态的准备方法，无菌收集废弃的健康人脐带血，分离出血浆，再使用生理盐水稀释细胞层，用密度梯度分离法进行分离单个核细胞，单个核细胞洗涤后，使用分离出的脐带血血浆进行稀释重悬，调整单个核细胞的浓度，密封于血浆袋中使单个核细胞处于应用前状态；此方法与即往的方法在处理程序和方法上有所不同，本方法减少了与单个核细胞接触的试剂种类、数量和时间，不需要培养、传代、冻存等步骤，避免了其他试剂接触对单个核细胞生存和生长的影响；本方法使用脐带血血浆最后稀释重悬分离洗涤后的脐带血单个核细胞，使脐带血单个核细胞在应用前处于采集前的生长环境和状态，并且使脐带血单个核细胞在体外的时间最短能减少到1.5小时，对保证细胞的活力、生存和生长具有巨大的促进作用，在应用前的各项检查中均符合单个核细胞应用的要求。

主权项

一种单个核细胞移植前状态的准备方法，其特征在于，它是采用以下工艺方法完成的：无菌收集废弃的健康人脐带血置于抗凝血浆收集袋中，温度为0～8摄氏度在时间不大于4小时运送至细胞处置室，将脐带血移入离心管中，1500～2500转/分钟离心10～15分钟，将上层血浆层移出备用，在剩余细胞层中加入生理盐水，加入生理盐水的量为细胞层体积的3～6倍，充分混匀，形成细胞悬液；在新的50毫升离心管中加入密度为1.077的淋巴细胞分离液，再将细胞悬液沿离心管壁缓慢的加入淋巴细胞分离液的上方，使上层细胞悬液与下层淋巴细胞分离液体积的比例为1:1，分装完成后，离心，转速为1000～1500转/分钟，离心时间为25～40分钟；离心管中液体分层，中间的白细胞层即为单个核细胞层，使用移液管轻轻吸出单个核细胞层置一新的离心管中，加入生理盐水充分混匀；洗涤三遍，将放置备用的血浆加入洗过三遍的单个核细胞中充分混匀，制备成脐带血单个核细胞血浆悬液，调整脐带血单个核细胞血浆悬液的浓度为1×106～2×106/毫升，20～40毫升脐带血单个核细胞血浆悬液装于一个血浆袋中密封，并同时取脐带血单个核细胞血浆悬液2毫升进行细菌、支原体、内毒素、乙肝表面抗原、丙肝抗体、梅毒抗体、艾滋病抗体检测；密封于血浆袋中的脐带血单个核细胞血浆悬液在时间不大于8小时进行使用。