[发明专利]一种菌肽活性蛋白饲料及其制备和应用方法

摘要

本发明公开了一种菌肽活性蛋白饲料及其制备和应用方法，利用甲基营养型毕氏酵母Pichia Pastoris这一理想的真核蛋白高水平表达系统，将青鱼鱼生长激素基因定向克隆到酵母整合型质粒载体，经转化、筛选、诱导表达，获得了高效表达的重组鱼生长激素基因工程酵母菌。通过以大米蛋白为发酵培养物进行生物发酵，制备菌肽活性蛋白饲料，而后直接使用或者将其与常用鱼类饲料混合使用，在降低饲料生产成本的同时，实现促生长和提高抗病的作用，从而增加鱼类养殖效益。

主权项

一种菌肽活性蛋白饲料的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)在发酵罐中，含有以下质量百分比组分的发酵液进行发酵：诱导剂0.5‑1％、大米蛋白浓度6‑7％、鱼类生长激素基因工程酵母菌种子液5‑6％，其余为水；发酵的条件如下：发酵时间96h，发酵温度28‑30℃，pH6.0‑7.5，转速300rpm，通气量3L/min；(2)对发酵得到的混合物进行喷雾干燥即得；所述的鱼类生长激素基因工程酵母菌是将青鱼生长激素cDNA定向插入含强启动子AOX I的表达载体pPIC3.5k，构建表达载体pPIC3.5K‑bcGH；再将其电击转化导入组氨酸缺陷型酵母GS115菌株得到，将获得的鱼类生长激素基因工程酵母菌经过如下活化培养过程后得到发酵用的种子液：取‑80℃冰箱保藏的重组bcGH酵母菌种划线转接到MD平板，30℃恒温倒置培养3‑5天，接1环生长良好的MD平板种子至装有50mL种子培养基的500mL摇瓶中，置于300rpm恒温摇床，30℃振荡培养菌液OD600至2‑6，时间为10‑24小时即可。