[发明专利]测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法

摘要

本发明公开了一种测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法，该方法包括如下步骤：(1)待测样品溶液的制备；(2)标准品溶液的制备；(3)取待测样品溶液，步骤(2)制备的溶液用Waters反相C18色谱柱进行分离，二极管阵列检测器检测，得到相应色谱图，通过标准品溶液中各维生素的保留时间定性判定待测样品溶液中的各维生素；(4)通过色谱图中各维生素峰面积的比例关系，并根据各维生素标准品溶液的浓度分别获得待测样品溶液中所含各维生素的质量浓度；(5)根据浓度，通过公式计算待测样品溶液中维生素的含量：本方法测定简便、快速、准确，在对保健食品原料实施控制的同时缩短分析时间，降低有机试剂消耗。

主权项

1.一种测定复合维生素中维生素A、维生素D和维生素E的方法，其特征是包括如下步骤：(1)待测样品溶液的制备：称取质量为m克的待测复合维生素样品于100ml容量瓶中，加入氨水调节至pH值为7.8～8.5，加入300mg-500mg的胰蛋白酶，于65℃超声波水浴处理20-40min，静置冷却至室温，乙醇定容至刻度，摇匀过滤，滤除残渣，取V₁ml滤液于已装有50ml石油醚和5ml-10ml水的100ml的容量瓶中，振荡容量瓶使滤液分层，静置10min；取V₂ml石油醚提取液于40℃水浴中氮气吹干仪下氮吹浓缩后，用1ml甲醇溶解定容，得到待测样品溶液；(2)标准品溶液的制备：维生素D₂、维生素D₃混合标准品溶液的制备：①取维生素D₂、维生素D₃对照品各10mg，分别用甲醇溶解并定容至100ml棕色容量瓶中；②取步骤①获得的维生素D₂溶液V微升、维生素D₃溶液V微升，分别用无水乙醇稀释至10.00mL，得到维生素D₂的标准储备液和D₃的标准储备液，分别用表1所述的条件用紫外分光光度计测定维生素D₂储备液和维生素D₃储备液的的吸光值，用各自的比吸光系数E按照公式(1)计算出维生素D₂标准储备液和维生素D₃标准储备液的浓度；所述的维生素D₂、维生素D₃标准储备液的测定条件如表1所示：表1C=A×1×10.00E×100×V×10-9]]>……………………公式(1)式中：C-维生素D₂或维生素D₃标准储备液的浓度，单位为微克每毫升(μg/mL)；A-维生素D₂或维生素D₃的紫外吸光值；V-加入标准储备液的量，单位为微升(μL)；E-维生素D₂或维生素D₃溶液1％的比吸光系数；为维生素D₂或维生素D₃标准储备液稀释倍数；③取步骤②维生素D2、维生素D3的标准储备液各0.1mL，分别用甲醇稀释并定容至10ml容量瓶中，得到浓度分别为C1μg/ml的维生素D2和C2μg/ml的维生素D3的标准品溶液，合并二标准品溶液，得到维生素D2、维生素D3混合标准品溶液；维生素A标准品溶液的制备：①取维生素A，对照品10mg用脱醛乙醇溶解并定容至10ml棕色容量瓶中；②取步骤①维生素A溶液V微升，用乙醇稀释至10.00毫升，得到维生素A的标准储备液，用紫外分光光度计按照325nm测定维生素A标准储备液中的维生素A吸光值，并用维生素A的比吸光系数按照公式(2)计算出该维生素A标准储备液的浓度；C=A×1×10.00E×100×V×10-6]]>…………………………公式(2)C-维生素A标准储备液的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；A-维生素A的紫外吸光值；V-加入维生素A标准储备液的量，单位为微升(μL)；E-维生素A溶液1％比吸光系数；为维生素A标准标准储备液稀释倍数；③取步骤②中维生素A标准储备液0.1mL，用脱醛乙醇稀释并定容至10ml容量瓶中，得到浓度为C3μg/ml的维生素A标准品溶液；α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E混合标准品溶液的制备：①取α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E对照品各10mg，分别用脱醛乙醇溶解并定容至10ml容量瓶中；②分别取步骤①中α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E溶液V微升，分别用乙醇稀释至10.00毫升，分别得到α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E的标准储备液，分别用表2所述的条件用紫外分光光度计测定各标准储备液的的吸光值，用各自的比吸光系数E按照公式(3)分别计算出各标准储备液的浓度；表2：C=A×1×10.00E×100×V×10-6]]>…………………………公式(3)C-α-维生素E、γ-维生素E或δ-维生素E标准储备液的浓度，单位为毫克每毫升(mg/mL)；A-α-维生素E、γ-维生素E或δ-维生素E的平均紫外吸光值；V-加入α-维生素E、γ-维生素E或δ-维生素E标准储备液的量，单位为微升(μL)；E-α-维生素E、γ-维生素E或δ-维生素E标准储备液1％的比吸光数；为标准储备液稀释倍数；③取步骤②中α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E标准储备液各0.1mL，用脱醛乙醇稀释并定容至10ml容量瓶中，即得到浓度分别为C4μg/ml、C5μg/ml、C6μg/ml的α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E标准品溶液，合并上述三个标准品溶液，得到α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E的混合标准品溶液；(3)取步骤(1)的待测样品溶液V₃μl、步骤(2)制备的已知浓度的溶液各V₄μl，分别注入高效液相色谱仪中，用Waters反相C₁₈色谱柱进行色谱分离，二极管阵列检测器检测，得到上述标准品溶液和待测样品溶液的高效液相色谱图，通过上述标准品溶液中各维生素的保留时间定性判定待测样品溶液中的各维生素；所述的高效液相色谱仪的流动相为乙腈-甲醇-水体系或甲醇-水体系；(4)通过维生素A、D、E混合标准品溶液与待测样品溶液中维生素A、D、E色谱图中各维生素峰面积的比例关系，并根据各维生素标准品溶液的浓度C₁、C₂、C₃、C₄、C₅、C₆分别获得待测样品溶液中所含维生素A、D₂、D₃、α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E的质量浓度；(5)根据步骤(4)中得到的维生素A、D₂、D₃、α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E的质量浓度，分别通过下述公式计算待测样品溶液中维生素A、维生素D₂、维生素D₃、α-维生素E、γ-维生素E、δ-维生素E的含量：a、复合维生素待测品中维生素A含量的计算公式为：X1=C×(100/V1)×(100/V2)×(V3/V4)m]]>式中：X₁为复合维生素待测样品中维生素A的含量，μg/g；C为维生素A待测样品溶液的质量浓度，单位为μg/ml；m为复合维生素待测样品的质量，单位为gb、复合维生素待测品中维生素D₂或D₃的计算公式为：X2=C×(100/V1)×(100/V2)×(V3/V4)×40×1.07m]]>式中：X₂为复合维生素待测样品中维生素D₂或D₃含量，I.U/g；C为待测样品溶液中维生素D₂或D₃的质量浓度，单位为μg/ml；m为复合维生素待测样品的称取量，单位为g40为1μg维生素D₂或D₃的国际单位数1.07为维生素D₂或D₃的换算系数c、复合维生素待测样品中α-维生素E、γ-维生素E或δ-维生素E含量的计算公式为：X3=C×(100/V1)×(100/V2)×(V3/V4)m]]>式中：X₃为复合维生素待测样品中α-维生素E、γ-维生素E或δ-维生素E的含量，单位为μg/g；C为维生素E待测样品溶液α-维生素E、γ-维生素E或δ-维生素E的质量浓度，单位为μg/ml；m为复合维生素待测样品的称取量，单位为g。