[发明专利]一种新的大鼠胰腺导管上皮细胞原代培养方法

摘要

本发明提供了一种新的大鼠胰腺导管上皮细胞原代培养方法；它包括以下工艺步骤：a、从健康大鼠胰腺组织中分离主胰管；b、使用混合消化酶分步消化法对胰管组织碎块进行消化分离，获取细胞团；c、细胞团进行培养及纯化：时差转皿、使用梯度血清培养基联合纯化，得胰腺导管上皮细胞。本发明方法原料来源于常见的实验动物大鼠，利用主胰管周围器官的张力使其能从整体胰腺组织中得到快速有效的剥离。分步消化的方式可得到大小适宜的细胞团，所得培养细胞产量可比整体消化法提高了60％以上。联合使用取材、时差转皿、使用梯度血清培养基三种方式去除其余胰腺细胞污染，纯化上皮细胞；本发明的上皮细胞纯化率可达95％。

主权项

一种大鼠胰腺导管上皮细胞原代培养方法，它包括以下工艺步骤：a、从健康大鼠胰腺组织中分离主胰管；b、使用混合消化酶分步消化法对胰管组织碎块进行消化分离，获取细胞团；所述的分步消化法为：①取清洗后的胰管剪为碎块，加入胰管碎块4‑5倍体积的混合消化酶消化10‑15分钟，加入HBSS溶液吹打、清洗，自然沉淀，弃去上清液；加入剩余胰管碎块2‑2.5倍体积的混合消化酶消化5分钟，胎牛血清FBS终止消化，自然沉淀后弃去上清液；②在①步骤的剩余胰管碎块中加入2‑4倍体积的混合消化酶，消化5分钟，胎牛血清FBS终止消化，自然沉淀，收集消化液；重复前述步骤，继续消化剩余胰管碎块，直至无肉眼可见胰管碎块，合并收集的消化液放至离心管中，离心，弃上清，即得细胞团；所述的混合消化酶溶液中含有：0.1‑0.2％w/wV型胶原酶、0.1‑0.2％w/w透明质酸酶、0.1‑0.2％w/w大豆胰酶抑制剂；所述的消化温度为37℃；c、将步骤b得到的细胞团进行纯化培养，即得胰腺导管上皮细胞。