[发明专利]用于假单胞菌属细菌的可控表达载体及应用及控制目的蛋白产物或mRNA产生的方法有效
申请号: | 201010143481.3 | 申请日: | 2010-04-09 |
公开(公告)号: | CN102212544A | 公开(公告)日: | 2011-10-12 |
发明(设计)人: | 段康民;杨亮 | 申请(专利权)人: | 西北大学 |
主分类号: | C12N15/78 | 分类号: | C12N15/78;C12N1/21;C12N15/31;C12Q1/68;C07K14/21 |
代理公司: | 西安智邦专利商标代理有限公司 61211 | 代理人: | 王少文 |
地址: | 710069 *** | 国省代码: | 陕西;61 |
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摘要: | 本发明涉及用于假单胞菌属细菌的可控表达载体及应用及控制目的蛋白产物或mRNA产生的方法,具体涉及在铜绿假单胞菌PAO1中czcCBA的表达受锌、铜离子调控的现象,基于此调节机制构建的用于假单胞菌属细菌的可控表达载体,以及应用此表达载体在假单胞菌属细菌中控制目的基因产物或mRNA产生的方法。解决了现有的蛋白表达载体只表达不可控的技术问题,实用性强。 | ||
搜索关键词: | 用于 假单胞菌属 细菌 可控 表达 载体 应用 控制 目的 蛋白 产物 mrna 产生 方法 | ||
【主权项】:
一种用于假单胞菌属细菌的可控表达载体,其特征在于:所述载体采用以下方法制备:1】把铜绿假单胞菌PAO1基因簇czcCBA的启动子区域或假单胞菌属中与铜绿假单胞菌PAO1基因簇czcCBA同源基因的启动子区域前加入终止子,得到过渡载体4,从过渡载体4上取一段包含基因簇czcCBA的启动子区域和终止子的序列1;2】去掉质粒pUCP26中的多克隆位点和启动子PLac区域,得到中间片段2;把序列1和中间片段2连接成中间载体3;3】用PCR扩增,从表达载体pPROEX HT的pPROEX HTa中得到第一片段D1、从pPROEX HTb中得到第二片段D2、从pPROEX HTc中得到第三片段D3,所述第一片段D1、第二片段D2、第三片段D3分别包括多克隆位点和多聚组氨酸标签;4】将所述第一片段D1、第二片段D2、第三片段D3分别连入中间载体3,得到用于假单胞菌属细菌的可控表达载体pLY,所述可控表达载体pLY相应包括pLY‑A、pLY‑B、pLY‑C。
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