[发明专利]一种SecA ATPase抑制剂的筛选方法

摘要

本发明提供了一种筛选SecA ATPase抑制剂的方法，该方法提供了一种优化的ATPase酶活测定体系，建立了SecA蛋白ATPase活性抑制剂的蛋白水平筛选模型。本发明方法简单可靠，效率高，成本低，是一种理想的抗生素筛选方法。运用该筛选方法从化合物库的3220个样品中筛选得到可抑制绿脓杆菌SecA ATP酶的活性阳性化合物3个。从2096个微生物代谢粗提物中得到45个阳性样品，筛选阳性率为0.9％(以抑制率大于30％为筛选阳性标准)。

主权项

一种筛选SecAATPase抑制剂的方法，包括如下步骤：1)配置如下反应体系：反应物        终浓度Hepes         90～110mMMgCl2         9～11mMMnCl2         1.8～2.2mMATP           9～11mMPEP           0.9～1.1mMNADH          1.3～1.7mMSecA ATPase   2.5～3.5μg/100μl丙酮酸激酶    1.6～2.0U/100μl乳酸脱氢酶    1.6～2.0U/100μl2)设置如下各反应组：i)样品实验组：向1)所述反应体系中加入适量已知浓度的样品溶液；ii)阴性对照组：用等体积ddH2O代替1)所述反应体系中的SecAATPase；iii)阳性对照组：向1)所述反应体系中加入等量的i)所述样品溶液中除样品本身外的溶剂及溶质；3)反应开始后，测定各反应组OD340吸光值变化量，计算反应抑制率，对反应具有抑制作用的即为阳性样品。