[发明专利]木本植物的活体生长锥农杆菌转化法

摘要

本发明公开了木本植物的活体生长锥农杆菌转化法，包括农杆菌工程菌渗透转化液的配制、活体生长锥的转化接种、生长锥与农杆菌工程菌的共培养、抗性芽的筛选、抗性枝条的培养、转基因植株的鉴定等多个步骤；本发明突破了木本植物基因转化困难和再生困难两大技术瓶颈，不依赖于植物基因型和组织培养，具有转化效率高，操作简单，成本低廉等优点，适用于茶树等大多数木本植物，尤其是顶芽饱满的木本植物。

主权项

木本植物的活体生长锥农杆菌转化法，其特征在于：包括以下步骤：a、农杆菌工程菌渗透转化液的配制：将含有目的基因的农杆菌工程菌接种于含有筛选压的液体培养基中进行培养，当菌液OD600值达到0.5～1.0时，向菌液中补加筛选压，并加入渗透剂和表面活性剂，配制成农杆菌工程菌渗透转化液；b、活体生长锥的转化接种：在叶层平均温度为18～26℃、平均湿度为70～80％的条件下，将农杆菌工程菌渗透转化液注射至木本植物新梢顶芽芽苞内的生长锥上；c、生长锥与农杆菌工程菌的共培养：将转化后的新梢顶芽在覆盖吸水保湿材料并用遮阳网遮阴降温保湿的条件下共培养2～10天，控制叶层平均温度为18～26℃、平均湿度为70～80％；d、抗性芽的筛选：在共培养结束后，向新梢顶芽的生长锥上补加筛选压，抑制生长锥中非转化细胞的分裂，使转化细胞正常分裂并分化成抗性芽；e、抗性枝条的培养：按常规方法进行田间施肥和病虫防治管理，及时剪掉未经转化处理的枝条，使抗性芽生长成抗性枝条；f、转基因植株的鉴定：对抗性枝条进行转基因鉴定，结果呈阳性的植株即为转基因植株。