[发明专利]一种基于PCR-DGGE水体蓝藻检测方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种基于PCR-DGGE水体蓝藻检测方法及其快速检测试剂盒。检测步骤是：A、水样采集浓缩后，通过反复冻融释放出蓝藻DNA，在水浴中静置2min，离心后取1μL上清溶液作为模板DNA加入PCR管；B、按照DGGE装置说明书，制备丙稀酰氨变性梯度胶；C、将模板DNA加入PCR管进行PCR扩增反应；D、将标准DNA marker和PCR产物分别加入不同泳道进行DGGE电泳；E、对电泳结果进行分析鉴定。该方法鉴定速度快，不需对DGGE产物测序，蓝藻鉴别结果准确可靠。水体蓝藻检测试剂盒包括a、PCR相关试剂：蓝藻特异性引物和Taq酶；b、自行制备的蓝藻鉴定标准marker。c、DGGE电泳相关试剂。该试剂盒成分简单，检测成本低，能同时检测多个水样。

主权项

一种基于PCR-DGGE水体蓝藻检测方法：其步骤是：A、水样采集与处理：从自然水体采集含蓝藻的水样，通过浮游生物网浓缩，倒入分液漏斗静置30sec后，取中间部分的水样进一步离心，将其转入1.5mLEP管中，用去离子水反复洗涤3次后，加入50μL去离子水，反复冻融2次后，再次在-80℃冷冻5min，直接在旋涡仪上Vortex 1min后，在80℃水浴中静置2min，5000rpm/min离心1min，用移液枪取1μL上清溶液作为模板DNA加入PCR反应管；B、变性梯度胶制备：按照DGGE装置说明书，制备丙稀酰氨浓度为8％、变性梯度范围为25％-45％的变性梯度胶；C、PCR反应：取1μL上清溶液作为模板DNA加入PCR管，进行PCR扩增反应，反应条件为94℃预变性5min，94℃40sec，55-58℃、72℃各30sec，循环4次，接着94℃40sec，55℃30sec，72℃30sec，循环27次，接着72℃延伸10min，最后温度降至12℃恒温30min；D、DGGE电泳：将标准蓝藻鉴定DNA marker和PCR产物分别加入不同泳道，以50V-30min，120V-7h的条件进行DGGE电泳；E、分析鉴定：对电泳纬果进行染色、扫描分析，鉴定出水体中蓝藻种类。