[发明专利]氧化亚铁硫杆菌浸出低品位磷矿的方法

摘要

本发明涉及一种微生物浸矿技术，具体地说是涉及一种从湖北铜禄山铜矿酸性水坑中取样分离得到氧化亚铁硫杆菌浸出低品位磷矿的方法。所述方法包括如下步骤：1)取样；2)菌株的富集分离及驯化；3)磷的浸出。本发明方法的有益效果是：1.菌株活性高，耐性好：浸磷率高。2.成本低，降低了大量昂贵药剂配置培养液的成本，且该液体培养基中不用额外加入磷化合物。3.充分利用了磷矿石自身伴生的黄铁矿和磷矿中磷作为细菌生长能源物和营养物，有利于磷矿中伴生资源的循环和高效利用。4.环境友好：使用的酸性菌液量少，有利于减少环境污染。

主权项

一种氧化亚铁硫杆菌浸出低品位磷矿的方法，其特征在于：所述的方法包括如下步聚：1)取样：将用牛皮纸扎好的取样瓶与取样勺用高压灭菌器高压灭菌，在取样点打开牛皮纸，用酒精灯烧灼瓶口，用取样勺从酸性水坑中取样至取样瓶二分之一处，迅速扎好牛皮纸带回；2)菌株的富集分离及驯化：富集分离：将采集到的水样在无菌条件下以10％的接种量接入置入温度为30℃，转速为140r/min的恒温摇床中震荡培养；当9K基础培养基溶液的颜色由浅绿色开始变为红棕色时，取出菌液10mL转接到新鲜的9K液体培养基中继续培养，如此反复4～5次；经过富集后的细菌仍含有大量的杂菌，进行固液交替培养，分离纯化；将菌种采用平板划线法在固体培养基上涂布，置于30℃、140r/min的恒温培养箱中培养，长出菌落后，挑选单菌落于液体中扩大培养，如此反复4次，得到纯菌种再进行分子学鉴定确认为氧化亚铁硫杆菌；菌种驯化：将上述得到的纯氧化亚铁硫杆菌以10％接种量接入9K基础培养基中，在培养基中加入1g黄铁矿和1g磷矿，培养至溶液的颜色由浅绿色开始变为红棕色时，取出菌液10mL装入含有2g黄铁矿和2g磷矿有100mL的9K液体培养基的250mL锥形瓶中，按上述步骤继续培养，以每次均增加1克黄铁矿和磷矿量加入锥形瓶中，反复4次，以不断提高细菌的耐氟性和耐固性；9K液体培养基：分为基础培养基A和能源培养基B；基础培养基A液的成分：(NH4)2SO4 3.00g，K2HPO4 0.50g，KCl 0.10g，MgSO4·7H2O 0.50g，Ca(NO3)2 0.01g，加蒸馏水700mL使之溶解，用1∶1硫酸调pH值到2.0，于121℃，灭菌20min；能源培养基B液：FeSO4·7H2O 44.7g，加蒸馏水300mL，过滤除菌。待A 液冷却至室温后，与B液混合；固体培养基A液：(NH4)2SO4 1.50g，K2HPO4 0.50g，KCl 0.10g，MgSO4·7H2O0.50g，Ca(NO3)2 0.01g，琼脂15g，蒸馏水600mL，pH2.0，121℃，灭菌15min；B液：FeSO4·7H2O 44.0g，蒸馏水400mL，pH1.5过滤除菌；把A，B液混合倒在平板上；3)氧化亚铁硫杆菌浸磷方法：向250mL锥形瓶中加入100mL9K无磷基础培养液，依实验需要接入驯化后氧化亚铁硫杆菌1，2，4，8mL，分别称取黄铁矿0.5，1.0，1.5，2.0g和相应粒度74，97，150，300μm磷矿各0.5，1.0，1.5，2.0g到锥形瓶中，用1∶1硫酸调节初始pH1.0，1.5，2，2.5，在温度30℃，转速140r/min的恒温摇床中培养，28天之后从锥形瓶中取出1mL浸出液，采用磷钼黄比色法测定五氧化二磷浓度，根据实验前后溶液中五氧化二磷含量的变化，计算磷矿石中磷的浸出率，28天浸磷率为75.00％～78.43％。