[发明专利]一种大鼠气道平滑肌细胞的培养方法无效
| 申请号： | 200910192440.0 | 申请日： | 2009-09-18 |
| 公开（公告）号： | CN101812427A | 公开（公告）日： | 2010-08-25 |
| 发明（设计）人： | 冉丕鑫;王健;田艳;陈豫钦;蒋永亮;万利梅 | 申请（专利权）人： | 广州医学院;呼吸疾病国家重点实验室 |
| 主分类号： | C12N5/06 | 分类号： | C12N5/06 |
| 代理公司： | 广州广信知识产权代理有限公司 44261 | 代理人： | 张文雄 |
| 地址： | 510182 *** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | 本发明涉及一种大鼠气道平滑肌细胞的培养方法，其特征是：包括获取原代培养的大鼠气道平滑肌细胞和获取传代培养的大鼠气道平滑肌细胞二个步骤，其中步骤1)将大鼠气管中膜用消化液在30℃～45℃消化14～30min后收集气道平滑肌细胞，进行原代细胞培养；所述消化液由HBSS平衡盐溶液、I型胶原酶、牛血清白蛋白和二硫苏糖醇按比例配制而成。本发明培养方法技术稳定，重复性好，培养的细胞纯度高，形态均一，生长良好；独特配方的消化液将气道平滑肌层的消化时间控制在14-30min，克服了现有技术中因大鼠中膜平滑肌层较主动脉薄、平滑肌细胞较主动脉肺动脉少、气道平滑肌细胞萌出时间长、生长缓慢的缺点。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 大鼠 平滑肌 细胞 培养 方法 | ||
【主权项】：
一种大鼠气道平滑肌细胞的培养方法，其特征是：包括获取原代培养的大鼠气道平滑肌细胞和获取传代培养的大鼠气道平滑肌细胞二个步骤，1)将大鼠气管中膜用消化液在30℃～45℃消化15～30min后收集气道平滑肌细胞，进行原代细胞培养，获取原代培养的大鼠气道平滑肌细胞；2)当原代细胞达到90％融合密度后，用PBS溶液清洗，加入0.2～0.25％胰蛋白酶溶液室温消化1～2分钟，当细胞出现回缩、细胞间隙增大时，吸除胰蛋白酶溶液，清洗细胞，加入混合培养液，轻轻吹打使之形成细胞悬浮液，按1∶2接种于新的培养瓶中进行培养，3～5天至细胞生长至对数生长期，获取传代培养的大鼠腔静脉平滑肌细胞。
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