[发明专利]一种实时荧光聚合酶链反应检测香蕉穿孔线虫的方法

摘要

一种实时荧光聚合酶链反应检测香蕉穿孔线虫的方法，探针序列是：5′-FAM-AGCGGTTGTAGTCCAT-MGB-3′；正、反向引物序列分别是：5′-CTGGGTTGGCGTCTGTGAGT-3′、5′-CGACCTACGAGCCGAGTGA-3′。线虫的核酸提取方法提取效率高，提取的核酸纯度高。采用实时荧光PCR扩增仪可快速准确地对香蕉穿孔线虫，甚至单条香蕉穿孔线虫的幼虫、雌虫和雄虫进行检疫、检测和鉴定。反应时间仅为45分钟，检测结果直接显示在电脑屏幕上，无需电泳，节省时间，避免污染。且扩增灵敏度高，能够以单条香蕉穿孔线虫DNA含量的1/40为DNA样本模板进行PCR扩增反应。

主权项

1.一种实时荧光聚合酶链反应检测香蕉穿孔线虫的方法，依次有以下步骤：1)合成探针和引物，2)培养线虫，3)提取核酸，4)实时荧光扩增反应，其特征在于：所述步骤1)合成探针和引物，是先选择好探针RsP，然后设计尽量靠近探针的一对由特异性正向引物Rsf-F、特异性反向引物Rsf-R组成的一对特异性引物，再按照探针RsP和特异性正向引物Rsf-F、特异性反向引物Rsf-R的序列分别合成探针和特异性引物备用；所述探针RsP的序列是：5′-FAM-AGCGGTTGTAGTCCAT-MGB-3′；所述正向引物Rsf-F的序列是：5′-CTGGGTTGGCGTCTGTGAGT-3′；所述反向引物Rsf-R的序列是：5′-CGACCTACGAGCCGAGTGA-3′。