[发明专利]猪α干扰素/白细胞介素2嵌合基因、其构建及其蛋白纯化方法

摘要

本发明属生物基因工程技术领域，公开了一种用于猪α干扰素(PoIFN-α)/白细胞介素2(PoIL-2)嵌合基因的构建、表达及表达蛋白的快速复性、纯化技术。该技术采用重叠延伸PCR方法通过一基因柔性接头(linker)(G4S)3将PoIFN-α与PoIL-2的成熟肽基因构建成PoIFN-α-linker-PoIL-2嵌合基因并克隆入pGEM-T Easy载体，将嵌合基因亚克隆入pQE-30表达载体中进行原核表达。通过尿素变性、低浓度蛋白复性液复性、PBS溶液透析等步骤对表达的重组融合蛋白(rPoIFN-α-linker-PoIL-2)进行快速复性和纯化。纯化的rPoIFN-α-linker-PoIL-2融合蛋白在细胞上具有抑制水泡性口炎病毒(VSV)的增殖活性，作为抗病毒制剂主要成分，用于猪病毒性疾病的预防和治疗，高效、广谱、安全、价格低廉。

主权项

1、一种猪α干扰素/白细胞介素2嵌合基因，其特征在于，其有如下DNA序列：tgtgacctgc ctcagaccca cagcctggct cacaccaggg ccctgaggct cctggcacaa 60atgaggagaa tctctccctt ctcctgcctg gaccacagaa gggactttgg atcccctcat 120gaggcttttg ggggcaacca ggtccagaag gctcaagcca tggctctggt gcatgagatg 180ctccagcaga ccttccagct cttcagcaca gagggctcgg ctgctgcctg gaatgagagc 240ctcctgcacc agttctgcac tggactggat cagcagctca gggacctgga agcctgtgtc 300atgcaggagg cggggctgga agggaccccc ctgctggagg aggactccat cctggctgtg 360aggaaatact tccacagact caccctctat ctgcaagaga agagctacag cccctgtgcc 420tgggagatcg tcagggcaga agtcatgaga tccttctctt cctccacaaa cctgcaagac 480agactcagga agaaggaggg tggaggcggt tcaggcggag gtggctctgg cggtggcgga 540tcggcaccta cttcaagctc tacaaagaac acaaagaaac aactggagcc attgctgctg 600gatttacagt tgcttttgaa ggaagttaag aattacgaga atgctgatct ctccaggatg 660ctcacattta aattttacat gcccaagcag gctacagaat tgaaacacct tcagtgttta 720gtagaagaac tcaaagctct ggagggagtg ctaaatttag gtcaaagcaa aaactctgac 780tcagcaaata tcaaggaatc aatgaacaat atcaacgtaa cagttttgga actaaaggga 840tctgaaacaa gtttcaaatg tgaatatgat gatgagacag taactgctgt tgaatttctg 900aacaaatgga ttaccttttg tcaaagcatc tactcaacac tgact 945。