[发明专利]一种产苦马豆素的内生真菌的分离方法

摘要

本发明属于生物制药技术领域，具体涉及一种产苦马豆素的内生真菌的分离方法。本发明为解决现有技术存在的产量低、菌株变异造成损失的问题，现采用的技术方案是，一种产苦马豆素的内生真菌的分离方法，包括下述步骤：一、分离：离子水去尘，分离叶、茎、花，表面消毒，吸水、切割，然后分别将各组织块接种于培养基表面，培养箱中培养；待周围长出菌落时，挑取边缘菌丝接种于琼脂培养基表面，置培养箱中培养；若在PDA培养基上生长的菌落仍未纯化时，再次接种于培养基表面，重复此操作过程，直至得到纯化的菌株，二、采用经典的薄层色谱技术筛选。发明的优点如下：1.提取效率高、2.方法简便、易行。

主权项

1、一种产苦马豆素的内生真菌的分离方法，包括下述步骤：一、分离：用去离子水洗去甘肃棘豆(采自于青藏高原)表面的尘土，用灭菌的镊子将植物的叶、茎、花分离，然后将叶、茎、花分别用纱布包扎，进行表面消毒，表面消毒的程序为：首先用70％的乙醇浸泡30s，再用有效氯含量为1％的次氯酸钠溶液浸泡3min，最后用灭菌的去离子水冲洗2次，每次1min，将该去离子水接种于新制的PDA或Czapek琼脂培养基表面，观察30d，看该培养基表面是否有真菌生长，以此来检验表面消毒的效果；用灭菌的滤纸将经表面消毒的植物组织上的水分吸去，然后用灭菌的剪刀将叶、茎、花等分别剪成3mm大小的组织块，然后分别用灭菌的镊子将各组织块接种于水琼脂培养基表面，置培养箱中18℃培养；待组织块周围长出适当大小的菌落时，挑取边缘菌丝接种于PDA琼脂培养基表面，置培养箱中18℃培养；若在PDA培养基上生长的菌落仍未纯化时，将其再次接种于新制的PDA培养基表面，重复此操作过程，直至得到纯化的菌株。将分离到的真菌编号，分别接种于PCA斜面，于4℃中保存；二、采用经典的薄层色谱技术筛选。