[发明专利]产气荚膜梭菌甘油脱水酶激活因子基因及其1,3－丙二醇的生产方法

摘要

本发明涉及一种全新的甘油脱水酶激活因子基因的克隆及其在相关宿主中的表达，该激活因子的基因系克隆自产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)，它能够在正常的生化反应条件下将失活的甘油脱水酶激活，恢复甘油脱水酶的酶活力，也可以使甘油脱水酶在转化甘油的反应过程中不容易失活。在本发明的基础上，可进一步把甘油脱水酶激、1，3－丙二醇氧化还原酶等相关酶基因一起重组到大肠杆菌中，获得一个新的代谢工程菌，这个代谢工程菌可以通过发酵将淀粉、甘油或者葡萄糖转化为1，3－丙二醇。

主权项

1、一种甘油脱水酶激活因子基因，其特征在于：甘油脱水酶激活因子基因是从产气荚膜梭菌(clostridium perfringens)克隆得到，是所述的核苷酸序列包含在SEQ IDNO.1所述的核苷酸序列中，其基因的DNA序列和氨基酸序列如下所示：产气荚膜梭菌甘油脱水酶激活因子基因的DNA序列：1 ATGAAAATCA TAGCAGGAAT TGATATAGGA AACTCTTCTA CAGAAACTGC51 TTTAGGTAAG GTTTATGAAA ATAATGTTGA ATTTCTGTCT AGTGGGATAA101 TTCCCACTAC AGGAATCAAA GGAACGGAAG AAAATATAAG TGGGGTAATA151 GCTTCTTTAA ACCAAGCTTT AAAGAAAGCT AACTTAACTT TAGAAGATTT201 AGATTTAGTT AGAATTAACG AAGCAGCACC TGTTATAGGG GATGTTGCTA251 TGGAAACAAT AACTGAAACA ATAATAACTG AATCAACAAT GATAGGACAT301 AACCCGTCTA CTCCAGGAGG ATTAGGTGTA GGAATAGGTA AAACTATAAG351 ATTAGAAACT TTAGAAACTT TAAATATTAA TGAAATCAAA GAGGAAGATA401 ATGCTTTTAT TCCATTGGTT TTAGGAAATA TAAGTTTTTT AGAGGCTGTA451 TTTAGAATAA ATCAAGCAAC TAGAAGAGGT ATTAATATAA CTGCTGCCAT501 TGTTCAAAAG GATGATGGAG TATTAATCAA TAACAGATTA GATAAAAAAA551 TACCTATAGT TGATGAAGTT TCTCTTTTAG AAAAGGTTCC TGTAGATATG601 AAAGCAGCTG TTGAAGTAGC ACCACAAGGT TCAGTAATAA GACAGCTATC651 AAATCCATAT GGAATAGCTA CTGTTTTTGA CTTAAGTCCA GAAGAGACAA701 AAATGATTGT TCCTGTATCA AGAGCCTTAA TAGGAAATAG ATCAGCTGTT751 GTAATAAAAA CTCCTCAAGG GGATGTTAAG GAAAAGAAAA TACCAGCTGG801 TAAGATTAAT ATAACAGGAA TGAGAAGAAA AGAGTCTGTG GATGTTGAAG851 AGGGAGCAGA TAAAATAATG GAGGCTGTTA GCCTTTGTTC TCCAATAGAA901 GATTTAAGAG GAGATGCTGG TTCTAATGTT GGAGGAATGC TTGAAAAAGT951 TAGACAAGTT ATGGCTGATT TAACTAATCA AAGCATTTCA GATATAAAGA1001 TTCAGGATTT ATTAGCAGTA GATACTTTTA TCCCTCAAAA GGTTAAGGGT1051 GGACTTGCAA AAGAGTTTTC AATGGAGAAT GCTGTTGGAA TAGCAGCAAT1101 GGTTAAAGCT CATAAACTTC AAATGCAAAT AATAGCTAAT AAACTTGAAG1151 AAAAGTTAGG TGTTCCAGTA GAAGTTGGTG GAGTAGAAGC TGACATGGCA1201 ATAAGAGGAG CCTTAACAAC TCCAGGTACA AATACTCCTT TAGCTATTTT1251 AGATATGGGA GCTGGATCTA CAGATGCTTC TATTATAAAT AAAGAAGGTA1301 AAATAACATC AATACATTTA GCTGGTGCAG GAAACATGGT AACTATGCTT1351 ATTAAATCAG AATTAGGTAT AGAAGACTTT GGACTTGCAG AGGATATAAA1401 GAAATATCCT TTAGCTAAGG TTGAGAGTTT GTTCCATATA AGACATGAAG1451 ATGGAACTGT AGAGTTCTTT GAAAAACCTT TAGATTCTTC AGTTTTTGCT1501 AAGATTGTAA TTATTAAAGA GGGAATGCTT ATTCCGGTAG ATGGACAGAA1551 TTCTTTAGAA AAGATTAAAA ATGTTAGAAA AACTGCTAAG GAAAGAGTTT1601 TTGTAATTAA CTGTTTAAGA GCATTAAAAA GTGTTTCACC TACAGGAAAT1651 ATAAGAGATA TAGAATTCGT TGTTTTAGTT GGAGGATCAT CATTAGACTT1701 TGAGGTTCCT GAATTAGTAA CAGATGCTTT ATCTCATTAT GGAGTAGTTG1751 CAGGAAGAGG AAATATAAGA GGATGTGAAG GTCCAAGAAA TGCAGTTGCA1801 ACTGGATTAG TATTAGCCTT TGACAGAAAG GGTGTCAAGG AAAATGATTA1851 AGGATTATAA TCATCCAAGC ATATTTGTAT ATTGTTCTTT AGGAATAAAT1901 GAAGTGGATA TAGAAGAAAT TCTATGGGGA ATAGAAGAAG AAGGAATCCC1951 TTTCATATTA AAAAATAAAG ATTTAAATGA TGCTAAGGAA CTTGCTAATT2001 TAGCTGCCAA TGATTCCAAA CTTTCAGTTG GAATAGGAGT TAATAGTAAA2051 GGTGATGTAA GTTTAACTAT TAATAAGTTA AAGGAAGAAG AACCTTTATT2101 CTTTATAAAC TTAGAAAAAG GAAATACCTG TTTAAGAAGT TTAGGAGCTA2151 ATGGAGCAAG ATTAGTTAAG GGGATGCCTT TAAAAAATAT TTAA编码本发明所述的甘油脱水酶激活因子的氨基酸序列：第一个亚基为616个氨基酸1 MKIIAGIDIG NSSTETALGK VYENNVEFLS SGIIPTTGIK GTEENISGVI51 ASLNQALKKA NLTLEDLDLV RINEAAPVIG DVAMETITET IITESTMIGH101 NPSTPGGLGV GIGKTIRLET LETLNIDEIK EEDNAFIPLV LGNISFLEAV151 FIINQATRRG INITAAIVQK DDGVLINNRL DKKIPIVDEV SLLEKVPVDM201 KAAVEVAPQG SVIRQLSNPY GIATVFDLSP EETKMIVPVS RALIGNRSAV251 VIKTPQGDVK EKKIPAGKIN ITGMRRKESV DVEEGADKIM EAVSLCSPIE301 DLRGDAGSNV GGMLEKVRQV MADLTNQSIS DIKIQDLLAV DTFIPQKVKG351 GLAKEFSMEN AVGIAAMVKA HKLQMQIIAN KLEEKLGVPV EVGGVEADMA401 IRGALTTPGT NTPLAILDMG AGSTDASIIN KEGKITSIHL AGAGNMVTML451 IKSELGIEDF GLAEDIKKYP LAKVESLFHI RHEDGTVEFF EKPLDSSVFA501 KIVIIKEGML IPVDGQNSLE KIKNVRKTAK ERVFVINCLR ALKSVSPTGN551 IRDIEFVVLV GGSSLDFEVP ELVTDALSHY GVVAGRGNIR GCEGPRNAVA601 TGLVLAFDRK GVKEND第二个亚基为116个氨基酸1 MIKDYNHPSI FVYCSLGINE VDIEEILWGI EEEGIPFILK NKDLNDAKEL51 ANLAANDSKL SVGIGVNSKG DVSLTINKLK EEEPLFFINL EEGNTCLRSL101 GANGARLVKG MPLKNI。