[发明专利]一种利用环介导等温扩增技术检测豚鼠气单胞菌的试剂盒

摘要

本发明涉及一种利用环介导等温扩增(LAMP)技术检测豚鼠气单胞菌(Aeromonas caviae)的试剂盒和检测方法，属于病原菌诊断领域。主要技术方案是利用LAMP技术，针对16S和23S核糖体RNA基因转录间区的六个区域，设计四对高特异性引物，达到特异性检测豚鼠气单胞菌的目的。与传统方法相比，该方法所需设备和操作步骤简单，而且具有快速和高特异性优点，检测成本较低，适合普通诊所和野外检验。

主权项

1.一种利用环介导等温扩增技术检测豚鼠气单胞菌的试剂盒，其特征在于，它包括如下成分及各成分的作用浓度：(1)特异性寡核苷酸引物：FIP、BIP、F3、B3、(各引物浓度均为5-15μmol/L)；FIP：5’AGGCCCGCCGAGGCTGCGATTTTAGCGATAACAACGTTGA3’BIP：5’AATAAAGCATGATTTTCGTTTTTCCGTGAGAAGGGCGGTGTC3’F3： 5’AAGTTCGTTACCCAATGTAGAG3’B3： 5’CCCTTCTACCGCCGTGCAAG3’(2)DNA提取试剂：TE缓冲液(5-15mmol/L Tris，0.5-1.5mmol/L EDTA，pH 8.0)；蛋白酶K溶液(浓度10-20mg/mL，pH8.0)；Tris饱和酚(pH8.0)；乙酸钠(浓度2-5mol/L)；乙醇(浓度95％)；(3)PCR试剂管成分为：10×反应缓冲液(200mmol/L Tris-HCl(pH 8.8)，100mmol/L KCl，100mmol/L(NH4)2SO4，20mmol/L MgSO4，1％Triton X-100)(4)dNTPs(dATP，dTTP，dCTP，dGTP的混合物，每种浓度为5-15mmol/L)；(5)双蒸水；(6)BstDNA聚合酶(8u/μL)。