[发明专利]神经元性组织工程化周围神经的制备方法

摘要

本发明涉及生物组织工程技术领域，目前构建的组织工程化周围神经神经其桥接距离一般不超过30mm，不能满足临床上长段神经缺损修复的需求，且再生后功能恢复不佳。本发明的神经元性组织工程化周围神经的制备方法，选用以毛囊神经嵴干细胞以特定条件诱导分化的神经元样细胞和类施万细胞的混合细胞作为种子细胞，按1∶1的比例移入异种去细胞神经基膜管支架中构建。本发明制备得到的组织工程化周围神经可避免再生轴突外生及生长过程的误入，缩短了再生神经纤维到达效应器的时间，避免了效应器的萎缩，不仅能满足临床上长段神经缺损修复的需求，而且神经再生后能较好恢复神经功能。

主权项

1、一种组织工程化周围神经的制备方法，所选用的种子细胞是以毛囊神经嵴干细胞(NCSC)诱导分化的神经元样细胞和类施万细胞的混合细胞，且神经元样细胞和类施万细胞的比例是1∶1；所选用的支架是异种去细胞神经基膜管，该方法包括以下步骤：A)毛囊神经嵴干细胞的获得、培养和鉴定；B)毛囊神经嵴干细胞加入2000nmol/L维甲酸和500ng/mL音猥因子激动剂，作用7天诱导分化成神经元样细胞；毛囊神经嵴干细胞加入125ng/ml内皮素-1，作用7天诱导分化成类施万细胞；免疫细胞化学鉴定诱导后的神经元样细胞呈TubulinβIII阳性，类施万细胞呈S100阳性；C)异种去细胞神经基膜管支架的制备；D)体外构建组织工程化周围神经：将步骤B诱导的神经元样细胞和类施万细胞悬液按1∶1混合，制备细胞悬液，细胞密度为1.5×106/ml，用微量注射器抽取细胞悬液，将微量注射器沿纵轴伸入异种去细胞神经基膜管支架中，每隔5mm注射等体积的细胞悬液，构建组织工程化周围神经。