[发明专利]神经元性组织工程化周围神经的制备方法

权利要求书

1、一种组织工程化周围神经的制备方法，所选用的种子细胞是以毛囊神经嵴干细胞(NCSC)诱导分化的神经元样细胞和类施万细胞的混合细胞，且神经元样细胞和类施万细胞的比例是1∶1；所选用的支架是异种去细胞神经基膜管，该方法包括以下步骤：

A)毛囊神经嵴干细胞的获得、培养和鉴定；

B)毛囊神经嵴干细胞加入2000nmol/L维甲酸和500ng/mL音猥因子激动剂，作用7天诱导分化成神经元样细胞；毛囊神经嵴干细胞加入125ng/ml内皮素-1，作用7天诱导分化成类施万细胞；

免疫细胞化学鉴定诱导后的神经元样细胞呈TubulinβIII阳性，类施万细胞呈S100阳性；

C)异种去细胞神经基膜管支架的制备；

D)体外构建组织工程化周围神经：将步骤B诱导的神经元样细胞和类施万细胞悬液按1∶1混合，制备细胞悬液，细胞密度为1.5×10⁶/ml，用微量注射器抽取细胞悬液，将微量注射器沿纵轴伸入异种去细胞神经基膜管支架中，每隔5mm注射等体积的细胞悬液，构建组织工程化周围神经。

2、根据权利要求1所述的一种组织工程化周围神经的制备方法，其特征在于步骤A中毛囊神经嵴干细胞是从成体SD大鼠触须垫毛囊隆突区获取的，采用贴块法于神经干细胞培养液中培养，传代获得毛囊NCSC，免疫荧光细胞化学检测毛囊NCSC呈Nestin阳性和Sox10阳性。

3、根据权利要求1所述的一种组织工程化周围神经的制备方法，其特征在于步骤C采用1％溶血卵磷脂制备犬脱细胞神经支架，冻干并Co60照射灭菌后，备用。