[发明专利]一种石榴酒酵母的选育方法

摘要

本发明涉及一种石榴酒酵母的选育方法。现在使用的石榴酒酵母存在着发酵不彻底，石榴酒残糖高、酒度低、挥发酸高、果香淡薄、不宜储存等缺点。本发明根据自然界中野生酵母菌的存在，取石榴园的土壤、石榴树叶、石榴树皮、腐烂石榴、完整石榴的表皮加水离心分离培养；取果酒干酵母，用水活化培养；再将上述两种菌种接种在培养基上培养；经缓冲液冲洗、蜗牛酶处理、电击、紫外光照射诱变，最后经酵母培养基培养制成。本发明的优点是：酵母发酵力强，超过任何其它酵母；对乙醇、单宁、SO₂抵抗力强；能生成更多的乙醇；酿造出的石榴干酒酒香突出，易长期保存；酵母繁殖培养容易。

主权项

1.一种石榴酒酵母的选育方法，包括下列步骤：(1)取石榴园的土壤、石榴树叶、石榴树皮、腐烂石榴、完整石榴的表皮各10重量份，放入装有80份水的瓶中，离心机旋转30分钟，120转/分；取0.2毫升接种到用98％的无菌石榴汁和2％的琼脂制作的营养基中；(2)取果酒干酵母1g，用35-40℃水100毫升活化后，取0.1毫升接种于培养基中，28℃培养一天；(3)将上述(1)、(2)两种菌种接在培养基上，30℃培养一天；将培养后的酵母菌斑接种到用石榴汁97％，蛋白胨2％，酵母膏1％杀菌制成的溶液中，35℃，250转/分摇床震荡培养10-12小时；(4)取(3)菌液5毫升，3500转/分离心5分钟，用磷酸缓冲液洗2次，加3毫升预处理剂，29℃培养10分钟后，离心5分钟，3500转/分，弃去上清液；(5)取(3)所得菌液5毫升用蜗牛酶处理30-40分钟；(6)取(4)、(5)所得菌液各0.5毫升混合，用0.4mol/L Cacl2洗涤、离心，涂于培养基上，28℃培养3天；用电击仪电击，电击时间40分钟；(7)取5毫升电击后菌液置于直径9cm的平皿中，用20W紫外光管放于30cm处照射1-2分钟，并不断搅拌，稀释涂布诱变培养基中；(8)取澄清的石榴汁，调整糖度12-14％，PH：5-6，加琼脂2-2.5％，加热至90-95℃溶化，分装于试管中，塞上棉塞，115℃高温杀菌30-40分钟；冷凝后制成酵母培养基；取(7)菌种接种到酵母培养基上，在28-30℃恒温箱中培养3天，取出放在-10℃以下保存；数日后反复培养、提纯，置于-70℃以下贮存。