[发明专利]食品中鱼类过敏原快速检测试剂盒的制备和检测方法

摘要

本发明属于食品中过敏原的检测技术，具体地说是用实时荧光PCR技术检测食品中鱼类过敏原的试剂盒及方法。试剂盒包括PCR扩增反应液A、阳性对照DNA B；PCR扩增反应液A含有10×PCR反应缓冲液、硫酸镁、dNTP(含dUTP)、UNG酶、Taq酶、上游引物5′－CAGGACAAGAGTGGCTTCAT－3、下游引物5′－GAAGTTCTGCAGGAACAGCTT－3′、TaqMan－MGB探针5′－AGGAGGA(T/G)GAGCT－3′；鱼类过敏原的快速检测方法包括食品DNA的提取、鱼类过敏原基因的实时荧光PCR扩增和结果判定。其优点是快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好。

主权项

1.一种鱼类过敏原快速检测试剂盒，其特征在于其中的试剂包括(1)-(2)：(1)PCR扩增反应液A包括10×PCR反应缓冲液、0.1-0.4mmol/L dNTP(含dUTP)、2-4mmol/L硫酸镁、1-2U Taq酶、0.2-0.5U UNG酶、0.2-0.6μmol/L上游引物、0.2-0.6μmol/L下游引物′、0.2-0.6μmol/L TaqMan-MGB探针；其中10×PCR反应缓冲液含有100mmol/LpH8.8的三羟基甲基氨基甲烷-盐酸、500mmol/L氯化钾和1％曲拉通X-100；其中上游引物序列为：5′-CAGGACAAGAGTGGCTTCAT-3′、下游引物序列为：5′-GAAGTTCTGCAGGAACAGCTT-3′；其中TaqMan-MGB探针中间部位有一个简并碱基，序列为：5′-AGGAGGA(T/G)GAGCT-3′；(2)UNG酶：1U/μL。