[发明专利]一种构建酿酒酵母乙醇高产菌株的方法无效
| 申请号： | 200710060656.2 | 申请日： | 2007-12-28 |
| 公开（公告）号： | CN101215562A | 公开（公告）日： | 2008-07-09 |
| 发明（设计）人： | 侯丽华;马平生 | 申请（专利权）人： | 天津大学 |
| 主分类号： | C12N15/11 | 分类号： | C12N15/11;C12N15/81;C12N1/19;C12P7/06;C12R1/865 |
| 代理公司： | 天津市北洋有限责任专利代理事务所 | 代理人： | 陆艺 |
| 地址： | 300072*** | 国省代码： | 天津;12 |
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| 摘要： | 本发明公开了一种构建酿酒酵母乙醇高产菌株的方法，步骤为：以Ycplac33为载体，构建带有受半乳糖诱导启动子调控的HO基因的质粒Ycplac33－GHK；该质粒载有HO基因的开放阅读框ORF和终止子，HO基因的启动子是诱导型启动子GAL2，同时该质粒还载有KanMX选择标记；利用质粒Ycplac33－GHK构建四倍体菌株；用芬苯达唑处理酿酒酵母四倍体，使之发生染色体缺失，通过乙醇发酵从而得到非整倍体酿酒酵母乙醇高产菌株。本发明的方法构建的菌株，在浓醪发酵(初糖浓度为300g/L)中，乙醇产量较对照菌株提高了5.33％，残糖降低了58.70％，乙醇及高渗透压抗性是对照菌株的2.31倍。 | ||
| 搜索关键词： | 一种 构建 酿酒 酵母 乙醇 高产 菌株 方法 | ||
【主权项】：
1.一种构建酿酒酵母乙醇高产菌株的方法，其特征是包括如下步骤：(1)以Ycplac33为载体，构建带有受半乳糖诱导启动子调控的HO基因的质粒YCplac33-GHK；该质粒载有HO基因的开放阅读框ORF和终止子，HO基因的启动子是诱导型启动子GAL2，同时该质粒还载有KanMX选择标记；(2)将质粒YCplac33-GHK转入酿酒酵母双倍体菌株MATa/α中，通过半乳糖诱导后再做PCR验证菌株的交配型即可得到同宗配合的酵母双倍体细胞MATa/a和MATα/α，将它们进行融合后通过PCR验证菌株的交配型，其中PCR产物有544bp和404bp两条带对应的菌株即酿酒酵母四倍体；(3)用芬苯达唑处理酿酒酵母四倍体，使之发生染色体缺失，通过乙醇发酵从而得到非整倍体酿酒酵母乙醇高产菌株。
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